ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用论文.docVIP

　　ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用论文 郭晓 潘崚 侯兰芬 王友君 郭宏谋 杨琳 王志伟 孙宇 李栋梁 【摘要】 本研究探讨ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病（CML）细胞周期的调控作用。以RTPCR、方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、p38、cyclin D2、cyclin E、p27的mRNA表达及蛋白表达（其中ERK和P38为磷酸化ERK和磷酸化P38）及细胞周期分布，并分析其相关关系。结果表明： CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、P38、cyclin D2、cyclin E的mRNA表达和蛋白表达增高，P27的表达降低，且cyclin D2 蛋白表达与cyclin E、ERK和P38蛋白表达呈正相关(P 0.01)，与P27蛋白表达呈负相关(P 0.01)。 G0/G1期细胞减少，S期细胞增多，与对照组相比有显著性差异。结论： CML中P38、ERK mRNA表达和活性增加，激活下游的cyclin D2 、cyclin E和P27等细胞周期调控因子.freelia Abstract This study ed to investigate the regulative effect of ERK and p38 signal transduction pathRNA and protein expression of ERK, p38,cyclin D2, cyclin E and p27 (ERK and p38 ined by FCM, and their relationship RNA and protein expressions of ERK, p38,cyclin D2 and cyclin E in CML cells and K562 cells increased (P 0.01) and the expression of p27 decreased (P 0.01). There RNA expression and protein activity of ERK and p38 activate the cell cycleregulating proteins such as cyclin D2 ,cyclin E,p27 yeloid leukemia 慢性髓系白血病(CML)的分子生物学特点是存在bcr/abl融合基因，表达具有高酪氨酸激酶活性的BCR/ABL融合蛋白，它通过相关信号转导途径，影响下游的细胞周期调控分子的表达水平，进而扰乱细胞周期，与白血病细胞恶性生长和增殖有密切关系［1］。 Cyclin D2、cyclin E和P27是BCR/ABL通过相关信号转导途径调节细胞周期的重要靶蛋白，但其具体作用机制不清。本研究拟对CML细胞中cyclin D2、cyclin E和p27的表达状况及其与丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）信号转导途径的信号分子磷酸化p38、ERK表达的相互关系进行研究，以求进一步揭示ERK和p38信号转导途径对慢性粒细胞性白血病细胞周期的调控作用，为CML临床治疗的进一步探讨提供初步的理论基础。 临床资料 30例BCR/ABL阳性的CML慢性期患者，均按国内标准［1］、经临床血液学及细胞遗传学、分子生物学检查确诊。30例中，男性19例，女性11例，中位年龄47（38-64）岁。初治21例，曾用羟基脲、干扰素治疗9例（治疗最长7年，最短1月）；另选20例健康人，作为正常对照，其中男性11例，女性9例，中位年龄38（26-60）岁。 临床标本和细胞培养 分别抽取患者和健康人新鲜骨髓5 ml，肝素抗凝，制作6张骨髓片，其余骨髓加等量PBS稀释，用Ficoll淋巴细胞分离液（密度1.077）分离单个核细胞。获取的单个核细胞直接用于实验检测或保存于-80℃冰箱备用。 K562细胞株由本院中心实验室提供，置于含有15%小牛血清的RPMI 1640培养液中，在37℃、 5% CO2、饱和湿度的恒温孵育箱中培养，采用对数生长期细胞进行实验。 细胞周期的流式细胞术检测 分别取CML患者、健康人的骨髓单个核细胞和K562细胞各5×106个， 用PBS洗3遍，所得细胞用70%乙醇固定，不含DNA酶的RNA酶处理，碘化丙锭（PI）染色后进行流式细胞仪检测，并对获取数据进行细胞周期分析。 各组细胞中相关蛋白表达水平的L患者、健康人的骨髓单个核细胞和K562细胞各5×106个，加入1 ml蛋白裂解液(50 mmol/L TrisHCl pH=8.0、150 mmol/L NaCl、100 mg/L PMSF、1 mg/L aprotinin、1% NP40、0.1% SDS)，充分裂解，直至裂