陕西渭南引种北冰红葡萄子粉化学成分探析.docVIP

陕西渭南引种北冰红葡萄子粉化学成分探析 　　摘要：选取陕西渭南合阳县引种栽培的北冰红葡萄，分析了北冰红葡萄子粉所含的主要活性化学成分。结果表明，北冰红葡萄子粉中总酚含量为49.68 mg/g；原花青素含量为105.67 mg/g；单宁含量为32.04 mg/L；所含18种主要单体酚按含量高低分别为芦丁、表儿茶素、水杨酸、槲皮素、桔皮素、桑色素、阿魏酸、香豆酸、白藜芦醇、香草酸、没食子酸、绿原酸、香豆素、山奈酸、儿茶素、安息香酸、咖啡酸、丁香酸 ?P键词：北冰红；葡萄子粉；活性成分；陕西渭南 中图分类号：S663.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）04-0731-02 葡萄子是葡萄加工的下脚料，含有丰富的酚类化合物。研究表明，在众多的植物多酚中，葡萄多酚抗氧化清除自由基的能力较强，其抗氧化能力为维生素E的5倍、维生素C的20倍。葡萄多酚主要存在于葡萄子和葡萄皮中，果皮中多酚含量可达25%～50%，种子中则可达50%～70%[1-3]。酚是所有的酚类物质，包括多酚（Polyphenol）和单体酚。多酚是指一个苯环上含有2个以上（包括2个）羟基的物质，植物多酚又名植物单宁，是不同聚合度的黄烷-3-醇聚合物的混合物，又叫单宁酸、鞣酸，主要是一些引起涩味的的多酚类物质[4]。原花青素又名缩合单宁，是由不同数量的儿茶素、表儿茶素没食子酸缩合而成[5] 本试验选用的材料为陕西渭南合阳县引种栽培的北冰红葡萄品种，北冰红是山葡萄的一种。山葡萄是葡萄科葡萄属落叶藤本植物，属于东亚葡萄种群的野生种，原产于中国东北、华北及朝鲜、俄罗斯远东地区，是葡萄属中较耐寒的品种，也是东北地区酿造葡萄酒的主要原料[6，8]。对陕西地区北冰红葡萄子的活性成分进行了分析，旨在考察该地区引种的山葡萄活性成分，使葡萄子得到充分利用，为北冰红葡萄子的开发利用提供理论依据 1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 材料 陕西渭南合阳县种植的北冰红葡萄酿酒后下脚料 1.1.2 试剂 20%碳酸钠、0.5%酚母液、福林-消卡试剂、0.04%甲基纤维素溶液、饱和硫酸铵溶液、儿茶素 1.1.3 仪器 KQ-200VDE型双频数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；Waters2695型液相色谱仪，Waters公司；UV-2100型紫外/可见分光光度仪、RE52-92型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；HH-42型快速恒温数显水箱，江苏省医疗器械厂；离心机、恒温培养箱等 1.2 试验方法 1.2.1 提取方法 研究表明，使用超微粉碎技术比普通粉碎提取的多酚要高，真空干燥葡萄子粉的多酚和原花青素提取率均有一定程度提高。使用液氮冷冻粉碎结合冻干机冻干粉碎葡萄子，使用盐酸甲醇溶液30 ℃、40 kW功率下超声提取30 min的提取方法提取葡萄子中多酚物质。-80 ℃冷冻葡萄50粒，立即剥取葡萄皮，液氮冷冻粉碎成粉末装于培养皿中，在冻干机中冻干24 h，取出装于自封袋中，放置于-80 ℃中。提取时称取1 g干粉于50 mL离心管（离心管要用黑胶带或锡箔纸包裹），加入20 mL盐酸甲醇溶液（60%甲醇、0.1%盐酸）料液比1∶20，于超声提取器中水温30 ℃，40 kW下提取30 min，4 ℃下10 000 r/min离心10 min，收集上清液于丝口瓶中。然后在沉淀物中加入20 mL盐酸甲醇重复提取2次，合并3次所有上清液，摇匀，并储存于-80 ℃中 1.2.2 测定方法 1）总酚测定。建立福林-肖卡法标准曲线[7]。吸取一定体积葡萄子粉提取液，按标线制作方法加入各试剂，定容至10 mL，20 ℃避光静置2 h后，765 nm处测定吸光度 2）原花青素测定。绘制吸光度―原花青素浓度的标准曲线[7]。准确称取干燥后的葡萄子超微粉样品0.5 g，索氏提取法石油醚去除粗脂肪，置阴凉通风处挥尽样品中的石油醚。加甲醇150 mL超声波振荡提取30 min，重复2次，混合提取液得到样品溶液。根据原花青素的含量，用甲醇稀释至合适浓度，吸取1.0 mL测定吸光度，并根据标准曲线计算含量 3）单宁测定。建立甲基纤维素沉淀法（MCP法）标准曲线。在10 mL离心管中加入一定体积待测样品，样品组加入3 mL甲基纤维素溶液，上下翻转数次后静置2～3 min，加入2 mL饱和（NH4）2SO4溶液，去离子水定容到10 mL。室温下静置10 min后1 800 r/min离心5 min，280 nm测定吸光度，以蒸馏水为空白 4）单体酚测定。提取条件：Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相A液为水∶乙酸（98∶2），流动相B液为乙腈，梯度洗脱，流速为1.0