人体正常和曲张的大隐静脉中胶原亚型的比较论文.docVIP

　　人体正常和曲张的大隐静脉中胶原亚型的比较论文 【关键词】 ,,曲张静脉壁 【Abstract】 AIM: To determine the collagen subtype pattern in the greater saphenous vein of the lobs obtained from 21 normal and 37 varicose subjects and to pare the affected and unaffected segments. METHODS: Folloent and partial pepsin digestion, typeⅠ, Ⅲ Ⅴ collagens easured quantitatively in samples obtained from normal and varicose saphenous veins. RESULTS: Significant elevations of ents) al saphenous veins. The content of collagen type Ⅲ and collagen type Ⅴ in varicose veins al veins and as a result the CⅠ/（CⅢ+CⅤ）ratio in varicose veins increased significantly (CI content al veins. CONCLUSION： The elevation of the CⅠ/（CⅢ+CⅤ）ratio in varicose veins (P 001) may result in the considerable 处的健全节段收集到的.大隐静脉的瓣膜关闭不全是通过多普勒超声（PVL）［7］证实的.正常大隐静脉的标本来自21位在我院心脏外科中心接受冠脉旁路移植术的女性患者.收集到的标本立即冷藏于-120℃，以免结缔组织降解. 除非特别提到，所有的试剂均来自Sigma，St. Louis，MO，USA. 12 方法 1.2.1 胶原提取 用手术刀将大隐静脉切成长约1cm的片段，并将这些静脉组织样品片段放到滤纸上，按（500±001） g的等份称重.然后用4℃的包含不同的蛋白酶抑制剂的提取缓冲液［05 mol L-1 TrisHCl / 45 mol L-1 NaCl (pH74) ］洗涤组织.这些蛋白酶抑制剂有：胃酶抑素A（1 mg L-1），NEM（hylmaleimide）(2 mmol L-1)，PMSF（phenylmethylsulfonyl fluoride）(1 mmol L-1)，DIFP（diisopropyl flurophosphate）(1 mmol L-1)，亮肽素（1 mg L-1）和EDTA（依地酸）（20 mmol L-1）.洗涤后将其离心（10 000 g，30 min， 4℃）收集组织，抛弃上清液.在提取液中，经弹性蛋白酶消化，再经Tris缓冲的2 mol L-1 MgCl2和4 mol L-1胍HCl在4℃时洗涤后，蛋白多糖就被提取出来.同上所述，通过05 mol L-1醋酸条件下（pH25）部分的胃蛋白酶（Boeringer，Mannheim，Germany）的消化（酶底物比1：50），胶原被第二次提取，离心后澄清的上清液被收集.为了灭活胃蛋白酶，将NaOH溶液加入其中并调整pH75.在中性溶液中NaCl盐析可使CⅠ（22 mol L-1）提纯，同时留有混合CⅢ+CⅤ（44 mol L-1）成分.为除去残留的盐，用蒸馏水多次洗涤胶原，然后离心（20 000 g，20 min， 4℃）收集，称重并保存于-20℃直至使用. 1.2.2 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）分析 十二碳烯酰钠硫酸盐凝胶电泳（Sodium dodecyl sulfategel electrophoresis）(5%)用于定量评定从静脉组织中提取出来的不同胶原，并同标准人类胶原做比较.所用的SPSPAGE分离条件适宜于胶原.在样品缓冲液中（pH 68）胶原样本水溶5 min至沸腾，并在每一条带上加入等量的标准胶原蛋白（60 μg）.凝胶固定并在醋酸∶甲醇∶水［1∶1∶8］的溶液中用massie brilliant blue R250染色. 统计学处理：数据用x±s表示，组间各有关指标比较采用方差分析及Dunt t检验. 2 结果 2. 1 大隐静脉中提取的胶原SDSPAGE分析 通过特异的盐析而从正常的以及曲张的大隐静脉中提取出来的纯化的胶原用SDSPAGE分析［22-25］并同标准的CI和CⅤ相比较.Fig 1a为来自大隐静脉的纯化胶