人参总皂苷和小檗碱对肺癌PG细胞分泌免疫抑制性细胞因子的影响论文.docVIP

　　人参总皂苷和小檗碱对肺癌PG细胞分泌免疫抑制性细胞因子的影响论文 郝钰, 王萍, 吴珺, 邱全瑛 【摘要】 目的：观察人参总皂苷（ginsenoside, Gs）和小檗碱（berberine, Ber）对肿瘤细胞分泌免疫抑制性细胞因子转化生长因子β1（transforming grol）组、Ber（10 μg/ml）组、空白对照组和Jurkat组。用Gs和Ber作用PG细胞24 h后与Jurkat细胞共培养，24 h后倒置显微镜下观察Jurkat细胞生长的状态；台盼蓝拒染实验计数共培养6 h和24 h后Jurkat活细胞数；流式细胞仪检测共培养24 h后Jurkat细胞的凋亡率；100、50、25 μg/ml的Gs和10、5、2.5 μg/ml的Ber分别处理PG细胞，并设空白对照组（PG细胞未经药物处理），酶联免疫吸附测定法和放射免疫法检测PG细胞上清液TGFβ1和PGE2的含量。结果：Jurkat细胞与Gs和Ber处理过的PG细胞共培养后.freeledicine, on transforming gro of human lung carcinoma cell line PG and human T lymphocyte cell line Jurkat l) and Ber (10 μg/ml) for ticroscope. The viable count of Jurkat cells etry. PG cells l Gs and 10, 5, 2.5 μg/ml Ber respectively, and the content of TGFβ1 and PGE2 in PG cells elinked immunosorbent assay (ELISA) and radioimmunoassay (RIA) method. Results: After coculture ber of Jurkat cells ote the secretion of TGFβ1 in PG cells, but could not change the level of PGE2. Conclusion: Gs and Ber can promote the groay be related to the upregulation of Gs and Ber on TGFβ1 secretion in PG cells. Keymunologic; transforming groajor histopability plex, MHC）I类分子的缺乏、共刺激分子B7的缺陷、Fas分子下调耐受凋亡以及“Fas反击”和分泌免疫抑制性细胞因子等，使肿瘤不能有效地被免疫细胞识别和攻击，甚至主动下调宿主免疫功能，从而逃避抗肿瘤免疫反应。我们的前期研究结果表明，Jurkat细胞与PG细胞共培养后数目减少，人参总皂苷（ginsenoside, Gs）和小檗碱（berberine, Ber）可以促进PG细胞的这种作用，该结果可能与Gs和Ber增加PG细胞的FasL表达，促进PG细胞诱导Jurkat细胞凋亡的“Fas反击”作用有关。但Jurkat细胞与PG细胞共培养后数目减少的原因除与“Fas反击”诱导的凋亡有关外，也有可能与PG细胞分泌某些免疫抑制性细胞因子相关。本研究检测了PG细胞分泌转化生长因子β1（transforming grol，Ber 10 μg/ml。Gs、Ber分别处理PG细胞24 h，PBS缓冲液洗涤3次以洗去药液，消化离心后调整细胞浓度至2×105/ml，接种于25 cm2培养瓶，同时设立未经药物处理的对照组（空白对照组）。待细胞贴壁后（融合至80％左右），各组弃去培养液，各加入浓度为3×105/ml的Jurkat细胞悬液10 ml铺于PG细胞之上进行共培养。实验共培养组分为3组：Gs组、Ber组和空白对照组，同时设立Jurkat细胞单独培养组（Jurkat组）。以上4组每组设3个样本。100、50、25 μg/ml的Gs和10、5、2.5 μg/ml的Ber分别处理PG细胞24 h，弃去药液，冷PBS洗涤，离心重悬后各组用新鲜培养液调整至相同浓度，加入96孔培养板继续培养24 h（同时设立不用药PG细胞组），共7组，每组4个复孔。 1.4 样本采集 Jurkat细胞与PG细胞共培养6 h和24 h后，小心振荡培养瓶，使黏附的Jurkat细胞尽量脱落，移出细胞悬液于离心管内；各共培养瓶内加入胰酶消化液（无乙二胺四乙酸），使黏附的Jurkat细胞进一步脱落，镜下观察，至Jurkat细胞基本脱落而PG细胞未脱离时为宜，移入先前移出的Jurkat细胞悬液离心管内，离心弃上清，收集细胞，供台盼蓝