1α，25(OH)2D3对Th2细胞分化的影响论文.docVIP

　　1α，25(OH)2D3对Th2细胞分化的影响论文 .freell），分别设PD组［PHA＋1α，25(OH)2D3（10-8M）］和PDI组［PHA＋IL-4（450u/ml）＋1α，25(OH)2D3（10-8M）］进行培养。流式细胞术检测CD4+IL-4+细胞比例.freell）edium， including of PHA+1α，25(OH)2D3(10-8M) and PHA+1α，25(OH)2D3+IL-4. The differentiation of cord blood CD4+T cell etry-based intracellular cytokine detection method. One-C，计数后悬浮于RPMI1640培养液中。 1.3 分组培养 采用96孔培养板，每孔加入等量细胞悬液（浓度：106/ml）和PHA刺激剂（10μg/ml）。分PD和PDI两组进行培养，PD组加入1α，25(OH)2D3（10-8M），PDI组加入IL-4（450u/ml）＋1α，25(OH)2D3（10-8M）。1α，25(OH)2D3浓度与体内生理浓度相当，IL-4浓度则相当于正常细胞分化状态下的浓度。 1.4 CD4+IL-4+细胞比例检测 培养到第1、3天和第7天时，分别检测其中CD4+IL-4+细胞的比例。检测前作细胞计数，活细胞率≥80％则结果有意义。作应用流式细胞术检测前，以PMA、离子霉素、莫能霉素等对受检细胞进行处理。具体步骤包括激活、表面染色、穿透、固定等。应用PE－cy5标记的CD4单抗和8D4－8PE标记的IL-4抗体进行双色染色。相同的流式检测步骤重复3次，取均值。 1.5 统计学方法 采用SPSS11.5进行统计学分析，以α＝0.05为显著性检验标准。 2 结果 2.1 入选产妇的一般情况 健康新生儿脐静脉血9份。所有产妇为第1次分娩，顺产，羊水清。男4例，女5例，均为足月儿，新生儿APGAR评分均≥8分，发育良好。产妇妊娠期间无明显维生素缺乏症状，亦无额外补充，未接受任何影响免疫功能的治疗。 2.2 检测前的细胞计数 流式检测前的细胞计数，9例标本的细胞浓度均＞106/ml，最低为1.25×106/ml，活细胞率均＞90％，符合流式细胞术检测对细胞数量的要求，提示最终检测结果的意义。 2.3 流式细胞术检测CD4+IL-4+细胞浓度的结果 见表1。 表1 PD组和PDI组CD4+IL-4+细胞检测结果 （%） 注：（1）组内比较PD组F=7.932，PDI组F=7.162，P 0.01；（2）组间比较＃t=4.458，P 0.01；＃＃t=4.938，P＜0.01；＃＃＃t=3.028，P 0.05 2.4 统计学分析结果 PD组和PDI组3个时间点各自组内比较，方差齐性（P 0.05），差异有显著性（F=7.932和7.162，P 0.01）。两两比较显示，第7天均较第1天呈下降样改变，差异有非常显著性（P=0.001和0.015），提示1α，25(OH)2D3作用7天，对Th2细胞分化具有较强的抑制作用。组间比较显示，PDI组CD4+IL-4+细胞浓度的下降较PD组更明显，差异有统计学意义（d1 t=4.458，P 0.01；d2 t=4.938，P 0.01；d3 t=3.028，P 0.05）。提示IL-4共存条件下，1α，25(OH)2D3的抑制效应更显著。 3 讨论 近年发现，1α，25(OH)2D3是一种作用广泛的内分泌/旁分泌激素，对细胞的分化增殖起到重要的调节作用［1］。20世纪70年代后期，随着组织细胞上维生素D受体（VDR）的发现，确定其不仅作用于以往所知的小肠、远端肾小管和成骨细胞，参与钙磷平衡调节，还有许多未知的作用部位，如皮肤角化细胞、卵巢细胞和T细胞等。1α，25(OH)2 D3是一种脂质分子，能和一些细胞因子和生长因子组成细胞局部生物学行为调节网络［2］。一些研究阐明，1α，25(OH)2D3能抑制Th1细胞分化所必需的细胞因子IL-12和Th1细胞的产生，证实其在Th1介导的自身免疫性疾病中的效应。许多报道在指出1α，25(OH)2D3对Th1细胞因子具有抑制作用的同时，提出了对维生素D可能诱发变态反应性疾病的担忧。 变态反应性疾病包括哮喘、变应性鼻炎和变应性皮炎，其致病核心是Th2细胞功能的上调［3～5］，Th2细胞主要的细胞因子IL-4、IL-5和IL-13等能诱导原始细胞向Th2方向分化。本研究分组观察生理浓度的1α，25(OH)2D3在单一和并存IL-4的条件下，对CBMC Th2细胞分化的影响。结果显示，PD组的1α，25(OH)2D3干预对CD4+IL-4+起持续的抑