HPLC法测定拈痛丸中盐酸小檗碱的含量论文.docVIP

　　HPLC法测定拈痛丸中盐酸小檗碱的含量论文 庞小雄，宋粉云，钟兆健，夏汉铭 【摘要】 目的 测定拈痛丸中盐酸小檗碱的含量。方法 采用离子对色谱法，Diamonsil C18柱，乙腈水（体积比52∶48）（每1 000 mL加磷酸二氢钾3.4 g，十二烷基硫酸钠1.7 g）为流动相，流速为1.0 mL·min-1.freel，柱温为室温。结果 盐酸小檗碱平均回收率为99.8%，RSD为2.89%（n=6）。结论 该法可用于拈痛丸中盐酸小檗碱的含量测定。 【关键词】 拈痛丸；盐酸小檗碱；离子对色谱法；含量测定 Abstract:Objective To develop a method for the content determination of berberine hydrochloride in Niantonged on a DiamonsilC18 column using acetonitrile dihydrogen phosphate and 1.7 g of sodium laurylsulfate per 1 000 mL）as mobile phase. The floL·min-1 and the detection .Results The average recovery for berberine hydrochloride ethod can be used for the content determination of berberine hydrochloride in Niantongg，置200 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(盐酸小檗碱浓度为99 μg·mL-1)。 2.1.2 供试品溶液的制备取拈痛丸样品10包，研碎，取约1.5 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加入盐酸甲醇（体积比1∶100）约95 mL，60 ℃水浴中加热15 min，取出，超声处理30 min，室温放置过夜，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液045 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。 2.1.3 阴性对照液的制备取处方组成中除黄连外的其余成分制成不含黄连的阴性对照品，按“21.2”项下的制备方法处理得阴性对照液。 2.2 色谱条件及系统适用性试验色谱柱为 Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司），乙腈水（体积比52∶48）（每1 000 mL加磷酸二氢钾3.4 g，十二烷基硫酸钠1.7 g）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长265 nm，柱温为室温。分别取对照品溶液（盐酸小檗碱浓度为29.7 μg·mL-1）、供试品溶液和阴性对照溶液10 μL注入色谱仪，理论塔板数以盐酸小檗碱计算应不低于6 500；盐酸小檗碱的拖尾因子为1.16，保留时间约为21.8 min，盐酸小檗碱与其他组分可基线分离，阴性样品不干扰样品测定，见图1。 A. 对照品; B. 样品; C. 阴性 1. 盐酸小檗碱 图1 盐酸小檗碱对照品、样品及阴性的高效液相色谱图（略） Fig.1 HPLC chromatograms of berberine hydrochloride (A) and sample (B) and negative (C) 2.3 方法学考察 2.3.1 标准曲线制备分别吸取一定量的盐酸小檗碱对照品贮备液，加甲醇稀释成盐酸小檗碱浓度为4.95、9.9、19.8、29.7、39.6、49.5、59.4 μg·mL-1的溶液。依次进样10 μL，每个浓度测定3次以上。以峰面积（A）对对照品溶液系列浓度（C）进行回归，得盐酸小檗碱回归方程A=44 782C+42 971，r＝0.999 9。表明盐酸小檗碱浓度在4.95～59.4 μg·mL-1之间与峰面积线性关系良好。 2.3.2 精密度试验取质量浓度为29.7 μg·mL-1的盐酸小檗碱对照品溶液10 μL，连续测定5次，其峰面积的平均值为1 387 708，RSD为1.38%，表明仪器精密度良好。 2.3.3 稳定性试验取供试品溶液（C在0，2，4，6，8 h 分别进样10 μL，记录峰面积，结果盐酸小檗碱峰面积的平均值为1 341 450，RSD为216%，表明供试品溶液在8 h内稳定。 2.3.4 重复性试验取同一批号（C样品6份，照“212”方法制备，进样测定，结果盐酸小檗碱平均含量为1.914 μg·mL-1，RSD为0.85%，表明方法精密度良好。 2.3.5 加样回收率试验精密称取同一批号样品（C共6份，加入相应量的盐酸小檗碱对照品，照“2.1.2”方法处理