NQO1基因多态性与食管癌易感性的病例对照研究论文.docVIP

　　NQO1基因多态性与食管癌易感性的病例对照研究论文 周艳丽，陈华芳，史习舜，周紫荆，李国梁，潘培川，陈子龙，吴清波 【摘要】 ［目的］ 研究NQO1基因多态性与食管癌易感性的关系。［方法］ 采用1：2配对的病例对照研究.freelorphisms of NQO1 and Susceptibility of Esophageal Cancer Abstract: ［Purpose］ To investigate the relationship betorphism of NQO1 and susceptibility to esophageal cancer. ［Methods］ This investigation atched case,control study, and the C609T polymorphism in gene NQO1 ined ultiplicity model bet vegetables consumption and NQO1 TT genotype (OR=9.849, 95％CI: 3.733～25.985) ,.freelplification effect on the risk of esophageal cancer. Key s; case,control study; NQO1 gene polymorphisms; interaction 代谢酶基因多态性是不同个体代谢酶活性差异的主要原因，从而影响个体患癌的易感性。依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ：醌氧化还原酶(NQO1)又称D,硫辛酰胺脱氢酶，催化醌类及其衍生物发生还原反应转化为氢醌，为人体内一种重要的Ⅱ相反应酶。而醌是一类在自然界中广泛存在的有毒化合物，能诱发哺乳动物细胞癌变和坏死。研究发现NQO1存在多态性，即C609T，这个变异使酶活性显著降低。我们以福建省食管癌高发区安溪县为研究现场，在进行环境因素调查研究的同时，对NQO1基因多态性与食管癌的关系进行了探讨，并结合安溪高发区的环境危险因素对基因与环境的交互作用进行了初步分析。 1 材料与方法 1.1 研究对象 病例组为2003年11月至2004年8月间，经安溪县医院内窥镜及病理诊断确诊为食管癌的新发病例，剔除年龄＞75岁及体质虚弱者。对照组按1∶2配对，选择与病例居住同一乡村、无血缘关系、同民族、同性别、年龄相差±3岁以内的同期同院的非肿瘤患者（如心脑血管疾病、外伤等患者）为对照。病例和对照均为安溪县居民，并为当地常住户口(20年以上)。 1.2 调查方法及内容 采用统一编制的调查表，由经过培训考核合格的调查员直接询问每名研究对象后填写。调查内容主要有：一般情况、日常生活行为习惯（如吸烟、饮酒、饮茶等）、饮食习惯、饮食结构、居住史、家庭消费情况，消化系统疾病史及食管癌家族史等。 1.3 NQO1基因多态性的检测 运用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（PCR,RFLP）技术检测研究对象的NQO1C609T基因型。 1.3.1 标本收集及DNA提取 抽取各研究对象外周血5ml，置于一次性生化采血管中，离心分层，分装上层血清和下层血凝块，置于低温冰箱（－70℃）保存。采用常规高盐沉淀法提取基因组DNA1。 1.3.2 PCR扩增2 (1)引物序列为：Primer F：5′,AAGCCCAGACCAACTTCT,3′，PrimerR：5′,GCGTTTCTTCCATCCTTC,3′，由上海博亚生物技术有限公司合成。(2) PCR扩增反应体系：反应总体积为25μl，其中含10×PCR buffer 2.5μl，1.5 mmol/L MgCl2，200μmol/L dNTPs，引物F、R各0.2μmol/L，Taq DNA聚合酶（MBI产品）1.5U，基因组DNA80ng~100ng。(3) PCR循环参数：95℃预变性5min，然后94℃变性30s、56℃复性30s、72℃延伸45s，35个循环后，72℃延伸10min。 1.3.3 HinfⅠ酶切反应 酶切体系为20μl，包括：10×buffer 2μl，HinfⅠ内切酶（NEB产品）0.5μl（5U），超纯水7.5μl，PCR扩增产物10μl。酶切反应条件为：37℃水浴6h。酶切产物用2％琼脂糖凝胶（含溴化乙锭）、电压90V电泳1h。 NQO1基因型的判断：酶切片段仅195bp者为纯合野生基因型CC；195bp、119bp和76bp者为杂合基因型CT；119bp和76bp者为纯合突变基因型TT（见图1）。 1.4 统计分析方法 全部数据采用SPSS12.0软件建立数据库。运用χ2检验比较NQO1基因频率的Hardy,BzA)和甲基烷基亚硝胺(MANA)的动物模型中减少鼠的肿瘤发生15。