PCNA，Bcl-2和Bax在翼状胬肉中的表达及其意义.docVIP

　　PCNA，Bcl?2和Bax在翼状胬肉中的表达及其意义 颜美荣，李正贤，刘庚勋，周一鸣，彭昌福，王芳 【摘要】 目的 检测翼状胬肉中PA，Bcl?2和Bax的表达水平，探讨PA，Bcl?2和Bax在翼状胬肉发病中的作用。方法 采用免疫组化Elivision法检测20例翼状胬肉、10例正常结膜中的PA，Bcl?2和Bax表达水平。结果 20例翼状胬肉中PA，Bcl?2和Bax的阳性表达率分别为95%(19/20)，95%(19/20)和80%(16/20)，正常结膜中PA，Bcl?2和Bax的阳性表达率分别为60%(6/10)，20%(2/10)和60%(6/10)。PA和Bcl?2阳性表达两组间差异有显著意义（Plt;0.05），而Bax阳性表达两组间差异无显著意义（Pgt;0.05）。结论 翼状胬肉的发生发展可能与PA的高表达和Bcl?2与Bax表达失衡有关，可能是细胞异常增殖和凋亡失衡的共同结果。 【关键词】 PA；Bcl?2；Bax；翼状胬肉；凋亡；免疫组织化学 翼状胬肉的发生，与紫外线照射及烟尘刺激有关，不仅影响外观,还可能损害视功能，其发病机制目前仍不十分清楚，近年来的研究发现，翼状胬肉是一组织增生性疾病，可能与细胞异常增殖和凋亡有关[1~2]，我们应用免疫组织化学Elivision法检测翼状胬肉组织中凋亡相关基因Bcl?2，bax和表示细胞增殖指标的PA的表达，旨在探讨PCAN，Bcl?2和bax基因产物在翼状胬肉发病机制中的作用。为翼状胬肉的化学药物治疗和基因治疗提供新依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 一般资料 　　选择本院2004—2005年门诊及住院的20例翼状胬肉患者的手术标本。其中男11例，女9例，年龄39~64岁,病程15个月~12年；对照组为同期手术的10例正常结膜组织，年龄35~62岁，所有病例均无其他角膜、结膜疾患。标本经10%甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋。 　　1.2 方法 　　标本经固定后，常规脱水石蜡包埋，作3 μm 连续切片，分别进行HE染色和免疫组织化学染色。切片脱蜡至水化，3%过氧化氢孵育10 min ，消除内源性过氧化物酶活性，蒸馏水冲洗，PBS浸泡3×2 min，微波炉抗原修复（95~98 ℃），自然冷却至室温，加入即用型Bcl?2，bax和1：100PA单克隆抗体，37 ℃ 孵育30 min，或4 ℃ 过夜，用普通小鼠IgG及PBS代替一抗作阴性及空白对照，PBS冲洗3×2 min，滴加增强剂（A），37 ℃ 孵育30 min，PBS冲洗3×2 min，滴加生物素聚合物（B），37 ℃ 孵育30 min，PBS 冲洗3×2 min。二氨基联苯胺显色，苏木素复染，中性树胶封片，显微镜观察照相。 　　1.3 染色结果判断 　　阳性细胞为呈棕黄色颗粒的阳性反应产物。每张切片在高倍显微镜下(200倍)随机选择5个视野，计算每个视野阳性细胞率，取平均值作为该标本的阳性细胞率。表达结果分为阴性（-）：无阳性细胞；弱阳性（+）：阳性细胞率lt;50%；强阳性（++）：切片中阳性细胞率gt;50%。 　　1.4 统计学方法 　　结果应用χ2检验进行统计学分析。所有数据在SPSS11.0统计软件上进行，以Plt;0.05为差异有显著性。第2期PA，Bcl?2和Bax在翼状胬肉中的表达及其意义 颜美荣，等 (责任编辑：admin) 　　2 结果 　　Bcl?2，Bax和PA在翼状胬肉及正常结膜中的表达，由表1可见翼状胬肉中Bcl?2和PA蛋白表达与正常结膜对比差异有显著性，而Bax蛋白表达在两组中则无统计学意义。光镜下观察，翼状胬肉上皮细胞中胞浆、胞膜呈棕黄色染色的细胞为Bcl?2，Bax阳性细胞，片状分布于上皮层及上皮下纤维层，但主要见于上皮基底层。正常结膜中仅有2例见到Bcl?2阳性表达，而Bax阳性表达较高。Bcl?2在翼状胬肉中棕黄色颗粒可见于胞浆、胞膜内，呈均匀分布，但主要见于上皮基底层染色(×400)， 正常结膜中未见到Bcl?2表达染色(×400)，Bax在翼状胬肉上皮中可见棕黄色颗粒均匀分布(×400)，正常结膜上皮中Bax阳性物质可见于胞浆、胞膜内。PA在翼状胬肉及正常结膜中的表达：光镜下观察，为棕黄色阳性颗粒位于细胞核，阳性细胞呈随机分布，静止期、进行期和复发性翼状胬肉的阳性细胞分布不同，静止期和正常结膜阳性细胞仅定位于上皮基底部，且呈散在分布，进行期阳性细胞增多，且向表层发展，复发性翼状胬肉阳性细胞明显增多，定位于上皮全层，染色最深。表1 Bcl?2，Bax在翼状胬肉及正常结膜的表达情况（略） 　　3 讨论 　　细胞凋亡与肿瘤的关系是近年来的研究热点之一。细胞凋亡的失控是否导致翼状胬肉的发生发展, 备受眼科医生关注，成为目前的研究重点。Bcl?2和Bax是该