Survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及其与生殖细胞凋亡的关系论文.docVIP

　　Survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及其与生殖细胞凋亡的关系论文 【关键词】 蛋白 Expression of survivin proteins in recovery of mice spermatogenesis and its correlation cell apoptosis HU ChuanYi 【Abstract】 AIM: To explore the expression of antiapoptotic proteins survivin in the testis tissue and its correlation cells apoptosis. METHODS: Adult Kunming mice g/kg bodyodels in the process of spermatogenesis recovery. Testes munohistochemistry SP method and the germ cell apoptosis ission electron microscope and terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP nick end labeling (TUNEL) technique. RESULTS: Survivin ostly expressed in the leydig cells, secondary spermatocytes and spermatoblasts. The germ cell apoptosis mainly occurred in primary spermatocytes and round spermatoblasts. Survivin expression cell apoptosis (r=-0.784, P 0.01). CONCLUSION: Survivininduced inhibition of apoptosis may participate in the balance of apoptosis and thus plays an important role in the normal spermatogenesis. 【Key cells 【摘要】 目的: 探讨新的凋亡相关基因survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及其与生殖细胞凋亡的关系. 方法: 间隔24 d两次腹腔注射白消安建立小鼠生精恢复过程的动物模型，第2次给药后随机分为1，2，3，4，6，8，10 cells, Gc）的增殖和自发性凋亡等过程，在正常的精子发生过程中，Gc的增殖和凋亡保持一定的平衡状态. Survivin是近年来分离出的凋亡抑制基因家族中的新成员，在调控细胞周期和抑制细胞凋亡中可能起重要作用. 我们通过对survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达变化规律及其与Gc凋亡的关系，试图阐明survivin对小鼠Gc凋亡的调控作用，以期能为男性生育的临床研究提供理论及动物实验的依据. 1材料和方法 1.1动物模型的建立和分组昆明雄性2~3 mo龄小白鼠56只（由湖北省医学科学研究院实验动物中心提供），体质量35~55 g，按标准饲养方法喂养. 间隔24 d两次腹腔注射白消安（德国Sigma公司产品），每次剂量为10 mg/kg，建立小鼠精子再生的动物模型. 模型建立后随机分为7组，分别为第2次用药后第1,2,3,.freel厚连续切片，分别行survivin蛋白免疫组化和细胞凋亡检测. 1.2方法 1.2.1电镜样品的制备新鲜睾丸组织1 mm×1 mm×1 mm, 置于25 mL/L的戊二醛预固定24 h，PBS清洗后转至10 g/L的锇酸中固定2 h，逐级丙酮脱水，Epon812包埋，超薄切片机切片，日立H600电镜观察. 1.2.2免疫组化采用超高敏SP法. 一抗为兔抗人survivin pAb(1∶100)，二抗为羊抗兔IgG(1∶120)，以上抗体及SP试剂盒均购自福州迈新公司. 具体操作按说明书进行，以该公司提供的阳性片作为阳性对照，以PBS液代替一抗作为阴性对照. 1.2.3检测细胞凋亡采用DNA原位末端标记(TUNEL法). TUNEL试剂盒为德国宝灵曼公司产品，检测程序参照试剂盒说明书，方法简略为：常规脱蜡入水，20 mg/L蛋白酶K 37℃消化15 min，30 mL/L H2O2阻断内源性过氧化物酶10 min，1∶10小牛血清封闭非特异性反应，滴加末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)反应液，室温孵育60 min，DAB显色. 以乳腺癌标本作为阳性对照，以PBS液代替TdT反应液作为阴性对照. 1.2．4S