根癌农杆菌介导大豆转Bt-cryIA抗虫基因.pdfVIP

中国油料作物学报 ２０１３，３５（１）：０２９－０３５ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ ｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１３．０１．００５ 根癌农杆菌介导大豆转Ｂｔ－ｃｒｙＩＡ抗虫基因 §  蓝　岚，吴　帅 ，申丽威，王志坤，孟凡立，宋　波，拓　云，刘珊珊 （东北农业大学，大豆生物学教育部重点实验室，农业部东北大豆生物学与遗传育种重点实验室，黑龙江 哈尔滨，１５００３０） 　　摘要：通过根癌农杆菌介导法，以子叶节为外植体将抗虫基因ｃｒｙＩＡ转入东农５０大豆品种中，对获得的Ｔ、Ｔ ０ １ 和Ｔ植株采用ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法进行分子检测，并对转基因大豆进行食心虫室内抗性鉴定。经 ２ ＰＣＲ鉴定，Ｔ植株有４株为阳性植株，Ｔ有３株为阳性植株，Ｔ有９株为阳性植株。对３株Ｔ 阳性植株进行ＲＴ－ ０ １ ２ １ ＰＣＲ检测，均扩增得到１８００ｂｐ目标片段，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析显示，有２株出现杂交信号，分别为单拷贝和双拷贝。 室内抗虫鉴定表明转基因植株食心虫抗性明显优于对照品种，在蛋白质及脂肪酸含量等品质性状上，与对照没有 显著差异。证明ｃｒｙＩＡ基因已整合到受体大豆基因组中，该基因在大豆Ｔ转基因植株中能够正常转录，抗虫基因 １ ｃｒｙＩＡ的导入可以提高东农５０对大豆食心虫的抗性，其后代的遗传稳定性还有待于进一步的研究。 关键词：大豆；根癌农杆菌；子叶节；ｃｒｙＩＡ；遗传转化 中图分类号：Ｓ５６５．１０３，Ｓ４３１．１２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１３）０１－００２９－０７ ＴｒａｎｓｇｅｎｉｃｏｆｓｏｙｂｅａｎｗｉｔｈＢｔ－ｃｒｙＩＡｇｅｎｅｍｅｄｉａｔｅｄｂｙＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ §  ＬＡＮＬａｎ，ＷＵＳｈｕａｉ，ＳＨＥＮＬｉ－ｗｅｉ，ＷＡＮＧＺｈｉ－ｋｕｎ，ＭＥＮＧＦａｎ－ｌｉ，ＳＯＮＧＢｏ，ＴＵＯＹｕｎ，ＬＩＵＳｈａｎ－ｓｈａｎ （ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｏｙｂｅａｎＢｉｏｌｏｇｙｉｎＣｈｉｎｅｓｅＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｏｙｂｅａｎＢｉｏｌｏｇｙａｎｄ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ／ＧｅｎｅｔｉｃｓｏｆＣｈｉｎｅｓｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＭｉｎｉｓｔｒｙ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ，１５００３０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｓｏｙｂｅａｎ （ＤｏｎｇＮｏｎｇ５０）ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｎｏｄｅｓ．ＴｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｃｒｙＩＡｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙＰＣＲ，ＲＴ－ＰＣＲａｎｄＳｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ．Ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｓｏｙｂｅａｎｐｏｄｂｏｒｅｒｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｂｉｏａｓｓａｙｍｅｔｈｏｄ．１１４ＰＰＴ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｎｄ４，３ａｎｄ９ｐｏｓｉｔｉｖｅｐｌａｎｔｓｆｒｏｍＴ，ＴａｎｄＴｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙＰＣＲ．