莲种子防御素基因序列分析及表达载体构建.pdf

园 艺 学 报 2010 ，37 （12）：1975 –1982 Acta Horticulturae Sinica 莲种子防御素基因序列分析及表达载体构建 黎 茵，张以顺，周玉亮，陈 琛，黄上志* （中山大学生命科学学院，广州 510275 ） 摘 要：从莲种子发育中期胚 cDNA 文库中克隆得到的防御素基因 cDNA 全长 561 bp，GenBank 登 录号为 EF421192 。分析发现该基因234 bp 的开放读码框编码 77 个氨基酸的多肽序列，除信号肽序列外 与其它不同来源的植物防御素基因有较高同源性，将其命名为 NnDefensin 。NnDefensin 蛋白带有 30 个氨 基酸的信号肽，具有 8 个半胱氨酸的高度保守结构等典型的植物防御素特征，成熟肽部分含有 γ–硫素蛋 白功能结构域。在系统进化上NnDefensin 与单子叶植物中的粳稻和小麦的同源蛋白，以及车前草同源蛋 白亲缘关系较为接近。通过 PCR 扩增克隆莲胚防御素基因片段并连接到载体 pBI121 和带有花生油体蛋白 种子特异启动子的载体 pAhOleo17.8 ︰GUS 中，成功构建了 35S 启动子控制的植物表达双元载体 pBI121-NnDef 和种子特异表达双元载体 pAhOleo-NnDef ，为该基因的功能鉴定及通过基因工程方法提高 转基因植物以及种子的抗病能力奠定基础。 关键词：莲；防御素；载体构建；种子特异 中图分类号：S 682.32；Q 785 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2010 ）12-1975-08 Sequence Analysis of Lotus （Nelumbo nucifera Gaertn ）Seed Defensin Gene and Plant Expression Vector Construction * LI Yin ，ZHANG Yi-shun ，ZHOU Yu-Liang ，CHEN Chen，and HUANG Shang-zhi （School of life Sciences ，Sun Yat-Sen University ，Guangzhou 510275，China） Abstract ：The lotus （Nelumbo nucifera Gaertn ）seed defensin gene was identified from the lotus cDNA library of middle development stage seed embryo. The 561 bp full length cDNA have a 234 bp open reading frame which encoding a 77 amino acid peptide and was designated as NnDefensin . The amino acid sequence of NnDefensin showed relatively high match with other plant defensin genes and phylogeny analysis showed that NnDefensin have close relationship with defensin from Oryza sativa japonica group ， defensin precursor from Triticum aestivum and defensin from Plantago major. NnDefensin have a strictly conserved γ- thionin domain of eight cysteine which is characteristic in plant defencin. Specific primers containing restriction enzyme site of Sma Ⅰ and Sa