食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定.doc

附件1： 食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定 BJS 201705 范围 本规定了食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的相色谱质谱方法。 本适用于液体乳、稀奶油、乳粉、婴幼儿辅助食品、、植物油等食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定。 原理 样品经乙腈提取后，再以正己烷除脂净化，高效液相色谱质谱 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 试剂 甲醇（CH4O）：色谱纯。 乙腈（C2H3N）：色谱纯。 甲酸（CH2O2）：色谱纯。 正己烷（C6H14）：色谱纯。 氯化钠（NaCl）：在550℃灼烧4h后备用。 标准品 香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素标准品纯度≥98.0%中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子附录A表A.1。 标准储备液（1.00mg/mL）：分别称取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素0.1g （精确至0.0001g）标准物质于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。避光于-18℃下保存，保存期为6个月。 混合标准储备溶液：分别吸取上述三种标准储备液1.00mL于同一100mL容量瓶中，用乙腈 稀释到刻度配制成浓度为10μg/mL的混合标准储备溶液，避光于-18℃保存，保存期为1个月。 基质溶液：按照.1规定的前处理方法操作制备基质溶液。基质混合标准系列工作液：分别准确吸取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素混合标准储备液适量(3.3.2)，用空白基质提取液（3.3.3）将其稀释为10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、160ng/mL标准系列工作溶液，临用时配制。 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 涡旋混合器。 超声波清洗器。 离心机：转速≥000r/min。 分析天平：感量0.1mg和0.01g。 婴幼儿谷类辅助食品过425μm的标准网筛 分析步骤 样品的制备与提取 婴幼儿配方乳粉、婴幼儿辅助食品滤膜0.22μm，有机相待分析 液体乳（巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳）、稀奶油滤膜0.22μm，有机相待分析 谷物碾磨加工品（大米等）：称取1g样品（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加入3mL水，涡旋振荡30s，加入7mL乙腈（3.1.2），涡旋振荡30s，超声处理25min，10000r/min离心5min后，取上层清液过0.22μm滤膜待分析 植物油脂：称取1g样品（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加入1mL水和10mL乙腈（3.1.2），涡旋振荡30s，超声处理25min，加入1g氯化钠（3.1.5），10000r/min离心5min后，取上层清液2mL于10mL玻璃离心管中，加入1mL正己烷（3.1.4），涡旋混合30s，5000r/min离心3min后，取下层清液，过滤膜0.22μm，有机相待分析 仪器参考条件 色谱条件 色谱柱：XDBC18柱，4.6mm×50mm，1.8(m，或性能相当者。 流动相：A：0.1%甲酸水溶液，B：甲醇，梯度洗脱条件见表1。 流速：0.3mL/min。 柱温：30oC。 进样量：2μL。 时间（min） A相（%） 相（%） 75 25 0.5 75 25 2 50 50 6 50 50 7 10 90 9 10 90 12 75 25 质谱条件 离子源：电喷雾离子源。 扫描方式：正离子扫描(ESI+)。 检测方式：多反应监测(MRM)。 离子化电压、雾化气、辅助气、气帘气压力、雾化温度应优化至最佳灵敏度，监测离子对和定量离子对及其他质谱参数见附录B中表B.1。 标准曲线的制作 用混合标准系列工作溶液(3.3.4)分别按仪器参考条件（6.2）进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积，以混合标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 定性测定 在相同试验条件下测定样品和基质混合标准工作溶液，记录样品和标准工作溶液中目标物的保留时间。若样品中检出与基质混合标准溶液（3.3.4）中待测物保留时间一致的色谱峰，且其定性离子与浓度相当的标准溶液中相应的定性离子的相对丰度相比偏差不超过表2规定的范围，则可以确定样品中检出相应的待测物。 表2定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% ＞50 20～50 10～20 10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 定量测定 相色谱质谱 结果计算 按下式（）计算样品中单种目标化合物的含量： …………………………………… 式 X——样品中待测组分的含量，单位为微克每千克（μg/kg）； ——从标准曲线中读出的测定液中各待测组分的浓度单位为微克每升μg/L）； m——样品称的质量，单位为克g）； V——液定容体积，单位为mL）。 计算结果测定的算术平均值表示