第二章实验原理-到CCUR首页-中正大学.PDFVIP

國立中正大學 物理所碩士學位論文 超解析率廣視野螢光顯微系統於細胞核膜形貌研究之應用 研究生 黃旭成: Hsu-Cheng Huang 指導教授 :林俊元 博士 Jiunn-Yuan Lin 1 致謝 首先我要感謝林俊元老師的教導， 在 我遇到問題時 總是不厭其煩的教 導我光 學上的知識並且指出實驗上的盲點，而在實驗經歷低潮時，老師也會適度給予 加油打氣，平時聊天總會帶給我們無比的歡笑，在師生關係中有著亦師亦友的 感覺 。 接著我要感謝系上的曲宏宇老師在系統出問題時陪伴我們到深夜一點半解決 問題，還有蕭建隆學長寫的自動控制程式，總是熱心的幫助我解決 Labview的 疑問 。還有合作夥伴生科所的黃敏郎老師以及王鶯 璇學姊提供許多生物樣品讓 我觀測並且不厭其煩的回答我生物領域的問題 。以及中研院的李超煌老師在口 試時 指出實驗上需要改進的地方 。特別感謝專題生莊翔淯 學弟在程式上以及實 驗上的一切幫助，總是陪我日日夜夜奮鬥 。還有王菀萱學姊總是熱心的幫我解 決電腦和文書處理的問題，也感謝丁丞旻學弟在處理數據時的幫忙，張國誌學 弟幫忙自動控制的除錯，陳世偉同學在暴風雨中幫我領取口委茶點，在生活上 帶給我樂趣的莊穎泓學弟 、游秉豐學弟 、何馨仁學妹 。 本篇論文獻給在背後時刻叮嚀關心我的家人及女朋友，以及 401實驗室全體 夥伴，謝謝你們帶給我的一切，獻上十二萬分的感謝 。 2 摘要 廣視野螢光顯微術在生物影像觀測上為一重要量測工具 ，本系統另外 加入二維 結構 光照明後突破繞射極限，大幅提高解析度，也具有良好的切片能力，因此在 觀測生物 樣品時能夠非侵入式的量測， 不破壞樣品本身的結構 。 在此次的研究中， 以本實驗 技術觀察真實生物樣品，藉由超高影像解析度分辨 蛋白質之間的相對位置，提供資訊幫助生科所的團隊能 夠近一步了解蛋白質 對人 體的影響 。 經過量測 ，系統橫向解析度為136 nm ，縱向解析度約為400 nm 。而在拍攝標 準生物樣品的時間僅需 10秒 。經過程式處理得到超高解析度影像只需 6秒 。而 在長時間的拍攝生物樣品時 ，系統的定位準確度可達1pixel 。 而在厚樣品的處理上 ，使用立體疊圖的方式來觀測細胞核膜邊界的形貌，藉以 提高辨識度 。 3 目錄 第一章 前言 2 第二章 實驗原理 3 2.1 光學解析度與週期性結構光源3 2.1.1 光學解析度3 2.1.2 週期性結構光源頻譜分析 4 2.2 以二維結構光照明提高解析度 5 第三章 實驗架設 9 第四章 系統解析度測定 11 4.1 橫向解析度 11 4.2 縱向解析度 12 4.3觀測生物樣品 13 第五章 實驗應用 14 5.1實驗目的 15 5.2回解流程 17 5.3實驗結果 20 Lamin 與 CG9669 20 Klar 與 CG9669 21 3D圖形觀測 22 第六章 結論 23 引用 24 1 第一章 前言 自 17世紀顯微鏡的發明後，顯微鏡的應用在醫學史 上扮演重要的角色。由於