前列腺酸性磷酸酶在非前列腺腺癌中的表达论文.docVIP

　　前列腺酸性磷酸酶在非前列腺腺癌中的表达论文 王毅，王芳，宿晓云，原田守，山田亮，伊东恭悟，颜炜群 【摘要】 目的： 探讨前列腺相关抗原前列腺酸性磷酸酶（PAP）在非前列腺癌中的表达水平. 方法： 分别用RTPCR方法和KN7, MKN28和 MKN45）和7种乳腺癌细胞（OCUBF, OCUBM, R27, MCF7, CRL1500, YMB1E和MDAMB231）表达PAP mRNA和PAP蛋白，结肠癌、胃癌和乳腺癌肿瘤组织中PAP呈阳性表达. 在检测的5种肾细胞癌细胞和肾细胞癌组织中均未发现有PAP的表达. 结论： PAP是结肠癌、胃癌和乳腺癌的新靶点. 【关键词】 酸性磷酸酶；前列腺；腺癌 【Abstract】 AIM: To study the expression of prostatic acid phosphatase (PAP) ,a prostaterelated antigen, in nonprostate cancer cells or tissues. METHODS: A variety of adenocarcinoma cell lines ined for their PAP expression at the mRNA and protein levels by RTPCR and KN7,.freelRNA and protein levels. But is as, including colon, breast and gastric cancers. 【Keya 引言 前列腺酸性磷酸酶（prostatic acid phosphatase, PAP）最早发现于1938年［1］.freelphoma）的肿瘤标志物［10］. Inoue等［11］也曾报道了PAP在食道癌和肺鳞片细胞癌细胞中的表达. 本研究拟在此基础上， 进一步探讨PAP在其他腺癌中的表达水平，为非前列腺癌的特异性免疫治疗提供新的靶点. 1 材料和方法 1.1 材料 结肠癌细胞系(colo 201, colo 205, colo 320, SKN7, MKN28, MKN45和KATOIII), 乳腺癌细胞系(OCUBF, OCUBM, R27, MCF7, CRL1500, YMB1E和MDAMB231)，肾细胞癌细胞系（RC3014, Caki1,VMRCRCAMIYA和KUR11），前列腺癌细胞系LNCaP. RNABee 试剂（TELTEST），RTPCR试剂盒（Takara），Taq DNA 聚合酶 (Promega Corp)，胰蛋白酶抑制剂，苯甲磺酰氟（Sigma），PAP抗体(ScyTek Laboratories.)， KIT试剂盒（DAKO）. 1.2 方法 1.2.1 RNA提取及RTPCR按照RNABee说明书提取处于对数生长期细胞的总RNA，其中5 μg 总RNA用于cDNA 的合成. 用于PAP表达检测的PAP特异性引物为: 上游引物: 5′CTC CTC AAC ATG AGA GCT GC3′, 下游引物：5′TAT ATA CTC TCC AAG TTC ATA3′. 利用Taq DNA 聚合酶进行PCR反应，共30个循环（95℃ 1 min, 60℃ 1 min, 72℃ 1 min）. PCR产物在20 g/L琼脂糖凝胶上进行检测. 1.2.2 Cs）分别作为阳性和阴性对照. 1.2.3 免疫组化甲醛固定、石腊包埋的病理切片经脱石腊后，置于含30 mL /L H2O2的甲醇溶液中来封闭内源性过氧化物酶活性，然后在加入第一抗体之前，用血清进行孵育以减少非特性染色. 按照说明书，利用CSA SYSTEM KIT试剂盒和羊抗人PAP抗体进行免疫组织化学检测. 2 结果 2.1 PAP mRNA 在非前列腺腺癌细胞中的表达在所检测的5种结肠癌、4种胃癌、7种乳腺癌和5种肾癌细胞中，3种结肠癌细胞（colo 201, colo 205和colo 320)、3种胃癌细胞(MKN7, MKN28和MKN45)以及所有的7种乳腺癌细胞中(OCUBF, OCUBM, R27, MCF7, CRL1500, YMB1E和MDAMB231)检测到PAP mRNA的表达；而在5种肾癌细胞中均未检测到PAP mRNA的表达（图1）. 2.2 PAP蛋白在非前列腺癌细胞中的表达在3种结肠癌细胞(colo 201, colo 205和colo 320)、2种胃癌细胞 (MKN28 和MKN45) 以及 4种乳腺癌细胞 (OCUB