微生物基本操作讲义-培训课件.ppt

三)V-P试验 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰， 二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应 一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别 四)甲基红（Methyl Red）试验 五)靛基质（Imdole）试验 六)硝酸盐（Nitrate）还原试验 七)明胶（Gelatin）液化试验 大肠杆菌：阴性（明胶为固态） 假单胞菌：阳性（明胶被液化） 十)硫化氢（H2S）试验 十一)三糖铁（TSI）琼脂试验 6.3血清学试验 血清学反应是指：相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。在食品微生物检验中，常用血清学反应来鉴定分离到的细菌，以最终确认检测结果。 血清学试验 谢 谢！ 5.2分离纯化 　　含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（Mixed culture）。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（Pure culture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化。 5.2.1倾注平板法 　　首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。 图1　倾注平板法（a）涂布平板法（b）图解 1.菌悬液 2.熔化的培养基 3.培养物 4.无菌水 稀释倒平板和涂布法 5.2.2涂布平板法 　　首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。（图1 b） 5.2.3平板划线法 　　最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。（图2）当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散生长，各自形成菌落，以便根据菌落形态及特征，挑选单个菌落，经过移种而获得纯种细菌 (纯培养)。 图2　平板划线分离法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法 划线接种示意图 5.2.4富集培养法 　　富集培养法的方法和原理非常简单。创造一些条件只让所需的微生物生长，使其能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。 　　所创造的条件包括选择最适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重复移种，最后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。 5.2.5厌氧法 为了分离某些厌氧菌，利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。 另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。 把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。 5.3培养 　　微生物的生长，除了受本身的遗传特性决定外，还受到许多外界因素的影响，如营养物浓度、温度、水分、氧气、ＰＨ等。微生物的种类不同，培养的方式和条件也不尽相同。 5.3.1影响微生物生长的因素 一)营养物浓度 二)温度 根据微生物最适生长温度的不同，可将它们分为三个类型： 　　(1)嗜冷微生物：其是适生长温度多数在-10℃－20℃之间 　　(2)中温微生物：其最适生长温度一般在20℃－45℃之间 　　(3)嗜热微生物：生长温度在45℃以上。 三）水分 四）氧气 (1)需氧微生物 (2)兼性需氧微生物 (3)微量需氧微生物 (4)耐氧微生物 (5)厌氧微生物 5.3.2培养方法 根据培养时是否需要氧气，可分为： 好氧培养； 厌氧培养。 一）好氧菌的培养 (1)固体表面培养法 (2)液体培养法 二)厌氧菌的培养 (1)深层穿刺培养 (2)化学吸氧与深层穿刺相结合 (3)抽气法 5.4菌种保存 菌种保藏方法很多，但主要是根据以下原则而设计的： (1)必须选用典型优良纯培养物进行保藏，并尽量采用其休眠体，如细菌物芽孢，真菌的孢子等进行保藏； (2)创造有利于微生物休眠的环境条件，如低温、干燥、缺氧、缺乏营养以及添加保护剂等； (3)尽量减少传代次数。采用以上措施有利于