革兰氏阴性杆菌-大肠杆菌介绍-培训课件.pptVIP

十、卫生细菌学检查 1、细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用倾注培养计算。 2、大肠菌数检验：指100g1000mL水中所含大肠菌群的最近似数（MPN），采用乳糖胆盐发酵试验检测。 乳糖胆盐发酵试验 发酵试验 分离培养 复发酵试验 食品执行标准：含乳蛋白冷冻饮品菌落总数应小于25000cfu/ml，大肠菌群小于450MPN/100ml； 含豆类冷冻饮品菌落总数应小于20000cfu/ml，大肠菌群小于450MPN/100ml；含淀粉或果类冷冻饮品菌落总数应小于3000cfu/ml，大肠菌群小于100MPN/100ml；食用冰块菌落总数应小于100cfu/ml，大肠菌群小于6MPN/100ml。 大肠杆菌 大肠杆菌的历史 肠杆菌科,为革兰氏阴性杆菌。根据生化反应、血清学试验、DNA同源性研究，肠杆菌科至少包括28个菌属，110个以上的菌种。 埃希菌属（Escherichia）中最重要的是大肠埃希菌(E. coli) ，常称为大肠杆菌。 大肠杆菌广泛分布于自然界，包括腐生菌、寄生菌和人及动物的病原菌。多数是人和动物肠道正常菌群的重要成员。 20世纪中叶，认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症。 一 、大肠杆菌的一般特性 1、G－直短杆菌，两端钝圆，散在或成对。 革兰染色 2、周身鞭毛，能运动，无芽孢 ，有的有荚膜。3、代谢能力强，代谢类型是异养兼性厌氧型 。 二 、培养及生化特性 1、培养特性 ① 兼性厌氧；　　　　 ② 最适生长温度37℃，最适生长pH7.2～7.6；　　　　 ③ 普通琼脂培养基：生长良好，圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约2~3mm； ④ 普通肉汤培养基：均匀浑浊，管底有粘性沉淀，液面管壁有菌环。 ⑤ 肠道菌鉴别培养基 麦康凯琼脂培养基：红色菌落。 伊红美兰琼脂培养基：黑色带金属闪光的菌落。 SS琼脂培养基：一般不生长或生长较差，生长者呈红色。 ⑥血平板：一些致病性菌株常β溶血。 麦康凯琼脂培养基 伊红美兰琼脂培养基 SS琼脂培养基 血平板  2、 生化特性 I：吲哚试验 M：甲基红试验 V：V-P试验 C：枸橼酸盐利用实验 （1）三糖铁培养基 ①配方 牛肉膏 5g 硫酸亚铁 0.2g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL 蛋白胨 20g 硫代硫酸钠 0.2g 蛋白胨 5g 琼脂 1 2g 乳糖 10g 2%酚红溶液 12.5ml 蔗糖 10g 葡萄糖 1g ②原理 测定细菌对葡萄糖、乳糖及蔗糖的发酵反应，以及能否产生硫化氢。可鉴别肠道菌。 葡萄糖 乳糖 蔗糖 硫酸亚铁 大肠杆菌 沙门菌 能产硫化氢菌株 发酵葡萄糖和乳糖；大量产酸产气 底层和斜面均呈黄色，底层有气泡 只发酵葡萄糖产酸产气 底层黄色，斜面保持红色 因形成硫化亚铁而使培养基呈黑色 对照 假单胞菌 志贺氏菌 沙门氏菌 大肠杆菌 变形杆菌 三糖铁培养基 吲哚试验 V-P试验 枸橼酸盐试验 甲基红试验 IMViC试验 三、大肠杆菌的基本结构 (一)细胞壁 大肠杆菌的细胞壁分外膜和肽聚糖层。 外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分，主要由磷脂、蛋白质和脂多糖组成。 脂多糖是革兰氏阴性细菌的内毒素，也是革兰氏阴性细菌细胞壁的特有成分，主要与抗原性、致病性及对噬菌体的敏感性有关。 外膜 周质 细胞质膜 （二）质粒 F因子：又称致育因子，插入、复制和转移的功能。有F因子的大肠杆菌为雄性，用F+表示，不含F因子的大肠杆菌称为雌性，用F-表示。通过F+和F-细菌的接合，F因子可经性菌毛传递给F-菌株，使F-菌株转变为F+菌株。 R因子 ：抗性转移因子和抗性决定因子 。 Col因子：产大肠杆菌素因子，编码合成大肠杆菌素 。  四、大肠杆菌的特殊结构 1、荚膜 荚膜具有抗原性，构成了大肠杆菌的表面抗原，即K抗原 。 2、鞭毛 由鞭毛蛋白组成，构成了细菌的鞭毛抗原，与运动有关。 3、菌毛 在细胞表面还含有一种比鞭毛更细更短更硬的丝状体叫菌毛，可分为普通菌毛和性菌毛。　　  大肠杆菌可以透过接合作用传递遗传物质。 五、抗原及血清型 （一）抗原 O抗原，即菌体抗原，为细胞壁脂多糖。该抗原刺激机体主要产生IgM类抗体。 H抗原， 即鞭毛抗原 ，H抗原主要刺激机体产生IgG类抗体，与其他肠道菌基本无交叉反应。 K抗原，即荚膜抗原