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一氧化氮对悬浮红细胞变形性的影响机制研究 摘 要 一氧化氮(NO)在生物体内作为一种反应性极强的自由基，具有广 93 泛的生理作用。NO 通过结合红细胞血红蛋白(Hb)中保守的 βCys 残 93 基(HbβCys)形成S-亚硝基血红蛋白（SNO-Hb ）。而Hb 分子内NO 能 93 从血红素转移至Hbβ Cys 巯基，调节NO 的贮存与释放，介导血管舒 张。库血红细胞随着保存时间的延长，NO 会发生大量流失，导致红 细胞扩血管活性、红细胞变形能力及血红蛋白携氧能力等生理活性下 降。因此，了解红细胞存储过程中NO 的流失问题，认识NO 在循环系 统中的作用机理，对保障红细胞输注的安全性和有效性具有极其重要 理论意义和临床价值。本研究拟通过补充NO 来改善红细胞的形态和 功能，，探讨NO 对红细胞形态学的影响机制，为红细胞的有效保存， 提供可参考的理论依据。 目的：本次实验对保存期间的悬浮红细胞补充不同浓度梯度的NO 试 剂：L-Arginine (L-精氨酸/NO 前体），分析悬浮红细胞不同保存时相 的红细胞变形性相关指标，以期探讨NO 与库血红细胞变形性的影响 机制，从而进一步评价储存悬浮红细胞的储存质量。 方法：取10 例各1u 新鲜悬浮红细胞，每例分装成4mL/管，总计500 管，进行编组编号，保存于专用储存冰箱内。在储存的不同时相（3h、 1d、3d、5d、7d、14d、21d、28d），每例样本各取5 管，其中1 管 不做处理，为对照组（A 组），另外4 管分别和不同浓度L-精氨酸（NO 前体）混合培养，浓度分别为1μM（B）、5Μm(C)、10Μm(D)、50Μm(E)。 培养1 小时后测定观察指标。主要有：（1）红细胞变形性相关指标： 血液高切粘度、低切粘度、卡松粘度、血浆粘度、红细胞变形指数、 聚集指数、刚性指数： （2）NO 荧光探针：通过测定平均荧光强度 （PKPosX）反应红细胞内的一氧化氮水平。 结果：保存期内对照组和实验组红细胞变形指数、聚集指数和刚性指 数均随着时间延长而逐渐增高，且变化显著。对照组高切相对粘度在 存放1d 后出现升高，随后维持相同数值，递增趋势不明显；低切粘 度在3h—5d 期间无显著差异，14d-21d 期间持续升高；卡松粘度在 （5d、7d、14d、21d）时间点呈逐渐升高的趋势。当NO 前体浓度为 5μM 时能够明显改善保存14d 内的库血红细胞变形性指数和3d-7d 内 的刚性指数；NO 前体浓度为10μM 时，能明显改善保存3d-21d 内红 细胞变形性指数，14d-21d 内的刚性指数；不同浓度的NO 对红细胞 聚集性指数均没有影响。高于相应的最佳NO 浓度范围的时，红细胞 变形指数受损。 结论：悬浮红细胞随着保存时间的延长，红细胞变形能力会逐渐降低。 NO 对库血红细胞具有调控作用，通过补充最佳浓度的NO （如5μM ） 时，会使红细胞变形性增加。 关键词：一氧化氮 悬浮红细胞 红细胞变形性 血液流变学 Nitric oxidesuspensionoferythrocyte deformabilitymechanism Abstract: Nitric oxide (NO) in vivo as a highly reactive free radicals, with a wide range of physiological effects. NO through a combination of red blood cell hemoglobin (Hb) in the conservative β93Cys residues (Hbβ93Cys), to form S-nitroso-hemoglobin (SNO-Hb). Hb molecule NO from the heme transfer to Hbβ93Cys thiol regulation of NO storage and release, mediated vasod