荆芥挥发油对内毒素中毒模型小鼠保护作用.docVIP

荆芥挥发油对内毒素中毒模型小鼠保护作用模12 h后，小鼠取血分离血清，采用ELISA及液相蛋白芯片技术测定炎症因子IL-18，IL-1β，IL-5，TNF-α，单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1），巨噬细胞炎性蛋白（MIP-1β），巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的水平；剖取肺脏、脾脏、胸腺称重，计算脏器指数；取小鼠全血进行白细胞（WBC）、血小板（PLT）计数；同时进行各组小鼠肺组织病理组织学检查。GC-MS检测结果显示薄荷酮、胡薄荷酮的相对质量分数分别为46.67%，33.92%，二者质量分数占总挥发油的80.59%。荆芥挥发油预防给药，0.452，0.226 gkg-1剂量均能显著降低模型小鼠血清IL-1β，IL-5，TNF-α，MCP-1，MIP-1β，M-CSF水平（P 　　[Key words] Schizonepeta volatile oil；endotoxin poisoning；protective effects；mice doi：10.4268/cjcm 脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）作为内毒素的主要成分，在多种疾病的病理进程中发挥重要作用，如感染性休克、多器官功能衰竭、发热反应、弥散性血管内凝血等。荆芥为临床常用辛温解表药之一，具有祛风解表、宣毒透疹、理血止痉之功效，多用于外感表证[1]。现代药理研究表明，荆芥抗炎、抗病毒作用良好，临床常用于治疗感冒发热、 咽喉肿痛和皮疹、皮肤瘙痒等。前期研究已证明荆芥挥发油具有良好的抗炎作用，其作用的发挥与影响花生四烯酸代谢、抗氧化、抑制促炎因子生成等有关[2-8]。内毒素作为细菌致病主要物质，能激活单核-巨噬细胞系统，产生大量炎症因子，而解表药恰能通过发汗解表祛邪之功效发挥抗炎、抗菌、抗病毒的作用，因此本课题组采用LPS造模，观察荆芥挥发油对模型小鼠的影响，以期进一步揭示和完善该提取部位的抗炎效应与机制，为其临床应用提供药理学数据 1 材料 1.1 动物 SPF级C57BL/6J小鼠，雄性，体重18～22 g，北京维通利华实验动物有限公司提供，许可证号SCXK（京）2012-0001，动物合格证号11400700130007 1.2 受试物 荆芥购自成都荷花池中药材市场，经成都中医药大学中药鉴定教研室严铸云教授鉴定，为唇形科植物荆芥Schizononepeta tenuifolia Briq.的地上部分。荆芥挥发油提取：按2015年版《中国药典》第4部通则2204挥发油提取法中甲法提取，无水硫酸钠充分脱水，得到浅黄色、透明油状液体，密闭贮存于棕色瓶中，4 ℃保存备用，挥发油的提取率为0.61%（mLg-1），符合2015年版《中国药典》荆芥含挥发油不得少于0.6%（mLg-1）的要求。GC-MS进行挥发油成分分析。实验时用0.35%聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯（吐温-80）溶液配制使用，给药剂量分别为其LD50的1/10和1/5，即0.226，0.452 gkg-1 1.3 试剂 地塞米松（Sigma，批号D-4902-25 mg）；LPS（Escherichia coil 055：B5，Lot#044 M4004V）购自Sigma公司。Mouse IL-18 ELISA kit，批号118018007，购自E-bioscience公司。MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel-Immunology Multiplex Assay，批号2683668，购自Millipore公司 1.4 仪器 HP6890/5973GC/MS仪（美国Agilent）；3001型酶标仪（美国Thermo Fisher Scientific）；Luminex Magpix（液相悬浮芯片仪，美国Millipore ）；BS323S电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；MEK-6318K全自动血液分析仪（日本Nihon Kohden公司） 2 方法 2.1 荆芥挥发油的GC-MS测定 将荆芥挥发油样本与色谱甲醇按50 μL∶2 mL进行混匀，然后采用0.22 μm尼龙筛网进行过滤，再装入棕色瓶内。将已处理好样本按照以下条件进行检测：HP-INNOWx色谱柱（0.53 mm×15 mm×50 m）；载气He；流速1 mLmin-1，柱初温80 ℃，程序升温10 ℃min-1至140 ℃，再程序升温5 ℃min-1至200 ℃后，程序升温25 ℃min-1至终温260 ℃；电离方式EI，电离能70 eV；倍增器电压330 V；扫描范围20～450。质谱标准谱库为美国NIST，相对含量的