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动物生理学实验 一. 蛙坐骨神经腓肠肌标本制备 1.刺激神经,肌肉收缩. 2.镊子夹闭神经,肌肉收缩,说明机械刺激有效. 一. 蛙坐骨神经腓肠肌标本制备 坐骨神经位置：股二头肌和半膜肌肌肉缝 用玻璃分针：质地坚硬，尖端纤细，很少游离出对神经和肌肉有兴奋作用的物质。 铜锌弓检测标本的原理：铜锌弓在溶液中沾湿以后，锌表面电离出正离子，金属里面形成负离子；铜表面电离出负离子，金属里面形成正离子。当两种金属丝同时接触神经纤维时，产生电流流动：锌，活组织内部，铜，从而对神经纤维形成电刺激效应。 基本原理：神经肌肉接头 可能出现的问题： 1、刺激神经，肌肉为什么会收缩？ 2、设计实验证明兴奋-收缩偶联作用。 二、刺激强度,刺激频率与肌肉收缩的关系 肌肉兴奋的外在表现是收缩。 神经-肌肉标本是由许多兴奋性不同的神经纤维（细胞）-肌纤维（细胞）组成，在保持足够的刺激时间（脉冲波宽）不变时，刺激强度过小，不能引起任何反应；随着刺激强度增加到某一定值，可使少数兴奋性较高的运动神经元兴奋，引起少数肌纤维收缩，表现出较小的张力变化。该刺激强度为阈强度，具有阈强度的刺激叫阈刺激。 刺激强度,刺激频率与肌肉收缩的关系 刺激强度,刺激频率与肌肉收缩的关系 刺激强度,刺激频率与肌肉收缩的关系 当其受到一个阈上强度的刺激时，爆发一次动作电位，迅速发生一次收缩反应，叫单收缩。单收缩曲线分为潜伏期，收缩期，舒张期三个时期。当相继受到两个以上同等强度的阈上刺激时，因频率不同，下一次刺激可能落在前一刺激所引起的单收缩的不同时期内，引起： 刺激强度,刺激频率与肌肉收缩的关系 几个分离的单收缩（频率低于单收缩频率，间隔大于单收缩时间）； 收缩的总和（强直收缩）: 不完全强直收缩（后一收缩发生在前一收缩的舒张期）； 完全强直收缩（后一收缩发生在前一收缩的收缩期内，各自的收缩不能分开，肌肉维持稳定的收缩状态）。 刺激强度,刺激频率与肌肉收缩的关系 刺激强度,刺激频率与肌肉收缩的关系 产生完全强直收缩所需最低刺激频率叫做临界融合频率。临界融合频率与单收缩的收缩时间成反比，收缩时间越短则临界融合频率越高。 肌肉的兴奋和收缩是不同的过程，在完全强直收缩中，收缩可以完全融合，但肌肉的动作电位并不融合，而是各自分离的锋电位。　　 三、神经干复合动作电位的记录与观察 神经纤维的兴奋表现为动作电位的产生和传导，神经干在收到有效刺激后可以产生动作电位。 神经的兴奋部位对于未兴奋部位来说呈负电位，两者之间存在电位差，因此可以用电极加以引导。如果在神经干的另一端安装电极，可以引导出双相的动作电位；而如果在两个引导电极间损伤神经，则引导出的动作电位为单相动作电位。 神经干复合动作电位的记录与观察 神经细胞的动作电位是“全或无”的，而坐骨神经干由许多不同类型的神经纤维组成，所以引导出的神经干动作电位是复合动作电位。此复合动作电位的幅值在一定的刺激强度范围内随刺激强度变化而变化。 将神经屏蔽盒、信号线和计算机连接好，取一根坐骨神经干标本小心搭在神经屏蔽盒内的刺激电极和引导电极上，确认神经与各电极接触良好，屏蔽盒盖接地。　 具体方法： 近刺激端的一对输入通道2，远刺激端输入通道4。 将标本置于屏蔽盒的电极上，神经干的中枢端置于电极一侧。 刺激后，2通道显示第一对电极的动作电位，4通道显示第二对电极的动作电位（靠后）。 软件计算两个动作电位时间差（动作电位起始端） 测定两对引导电极的距离 计算传导速度 神经干复合动作电位的记录与观察 1） 神经干兴奋阈值的测定 刺激强度从0.1V开始，逐渐增大刺激强度，观察所记录的曲线变化情况，当刚刚出现动作电位时的刺激强度即为蛙坐骨神经干的兴奋阈值。注意在图像上区分刺激伪迹与真正的动作电位。 ? 神经干复合动作电位的记录与观察 神经干复合动作电位的记录与观察 2） 双相动作电位 在刺激阈值的基础上继续加大刺激，观察动作电位的波形及幅度的变化。 神经干复合动作电位的记录与观察 刺激强度从0.250V开始增大时，动作电位的幅度也随之增大；当刺激强度达到0.400-0.500V之间时，动作电位的增幅变小；当刺激强度大于0.500V时，动作电位的幅度几乎不再发生变化，而刺激伪迹则可以随刺激强度的变化而不断变化。每个双相动作电位的持续时间约为1.8ms，幅值最高维持在2.230mV左右。 神经干复合动作电位的记录与观察 3） 单相动作电位 在两个引导电极之间用镊子损伤神经干标本，再加以一个高于兴奋阈值的刺激，观察动作电位波形的变化。 神经干复合动作电位的记录与观察 四、红细胞脆性实验 红细胞脆性试验就是测定红细胞对低于0.9% NaCl溶液的耐受能力。耐受力高者，红细胞不易破裂，即脆性低。反之，耐受力低者，红细胞易于破裂，即脆性高。 凡上层液开始