地塞米松对肺纤维化大鼠TNFα、IL8 和NO表达的影响论文.docVIP

　　地塞米松对肺纤维化大鼠TNFα、IL8 和NO表达的影响论文 【摘要】 目的 观察地塞米松对博莱霉素(bleomycin ,BLM)致肺纤维化1周大鼠肺泡巨噬细胞（AM）分泌TNFα、IL8和NO的影响，探讨地塞米松治疗特发性肺纤维化（IPF）的作用机制。方法 取复制肺纤维化模型后7 d处死动物，通过支气管肺泡灌洗获取AM，将其分为地塞米松（DEX）组和空白对照组，用DEX干预AM（空白对照组只加培养基），然后检测AM分泌TNFα、IL8、NO的能力。结果 用地塞米松处理AM后的培养上清中，TNFα、IL8、NO含量减少.freelethasone on concentration of TNFα，IL8，NO produced by alveolar macrophages（AMs） in bleomycininduced rat pulmonary fibrosis.Methods Five adult female ine anaesthesia and bronchoalveolar lavage (BAL) ed to obtain AMs. AMs ethasone group and control group. Cultured medium ethasone. The concentration of TNFα,IL8,NO in cultured medium edium ing from dexamethasone group control group.Conclusion Dexamethasone could reduce the secretion of TNFα,IL8,NO in AMs，ay be the possible mechanism of antifibrosis. 【Key onary fibrosis，alveolar macrophage,dexamethasone 特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis , IPF)是以肺泡及间质性炎症起病、继以肺泡结构进行性损害、细胞外基质蛋白胶原沉积为特征的慢性炎症性疾病［1］，其分为两个阶段，即早期肺泡炎阶段及后期炎症损伤后过度修复的肺纤维化阶段。目前国内外多数学者认为在肺泡腔内占绝对多数的肺泡巨噬细胞（AM）在肺纤维化的发病机制中起一个中心环节的作用［2］，在AM分泌的众多细胞因子中，TGFβ、PDGF、TNFα、IL8、NO、IL1等参与肺泡炎和/或肺纤维化的形成，异常活化的细胞因子和炎症介质形成一个复杂而多变的网络，参与肺纤维化的发生发展。多数研究发现，在BLM致大鼠肺纤维化模型中，气管内灌注BLM后第7天时肺泡炎最重，以后逐渐减轻，而AM可能起中心环节的作用，早期抑制肺泡巨噬细胞的活化及其炎性介质的释放可能有助于阻断肺纤维化的形成。因此，本实验通过观察地塞米松(dexamethasone ,DEX)对BLM致肺纤维化大鼠1周的AM分泌炎性因子的影响，探讨其抗纤维化可能作用机制。 1 材料与方法 1.1 肺纤维化模型的复制 取体重180～200 g的健康雌性（5 mg /kg）的生理盐水0.2～0.3 ml，经两气管软骨环间隙朝向心端刺入气管，将大鼠直立，继续朝向心端进针约1.0～1.5 cm，回抽无阻力，抽回空气，将药液注入气管，旋转动物，使药液在肺内分布充分、均匀。于气管内灌注后第7天处死动物。右心室采血处死动物，经肺动脉插管注入磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗双肺至肺脏呈苍白胶冻样，结扎左主支气管，右肺用PBS行支气管肺泡灌洗，回收液集中于无菌瓶中，过滤，离心，收集细胞。细胞悬液用培养液在培养瓶中经37℃、5%CO2、100%饱和水蒸汽的细胞培养箱内孵育纯化，弃培养液，收集贴壁纯化的AM备用。 1.2 AM的分组 空白对照组：致纤维化处理1周的大鼠AM的培养；DEX组：致纤维化处理1周的大鼠AM加入地塞米松(2.5 μg/ml)后的培养。两组AM采用24孔培养板培养，各组设8个复孔，每孔细胞数为2.0×105个，培养36 h后收集条件上清液，备用。 1.3 培养上清中TNFα、IL8、NO的检测 TNFα和IL8水平的检测采用双抗体夹心ELISA法。以抗大鼠TNFα或IL8 mAb包被酶标板，加入待测样本或标准品与之结合后，加入生物素化的检测抗体，洗板；再加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，洗板；加入显色剂显色。于波长450 nm处测定A值，通过绘制标准曲线即可得知待测样本中TNFα或IL8的浓度。采用酶法通过测定NO的代谢产物NO-2及NO-3，反映NO的水平。 1.4 统计学处理 用SPSS统计软件，进行t检验