菊酯类农药广谱型免疫层析试纸条的研究及应用.pdfVIP

第44卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第12期 2016年12月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 1900~1906 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.160428 菊酯类农药广谱型免疫层析试纸条的研究及应用 1 2 1 1 2 3 4 胡静 郭逸蓉 梁晓 刘贤金 朱国念 刘凤权 王鸣华 4 4 *1 王利民 华修德 张存政 1(江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,南京210014) 2(浙江大学农药与环境毒理研究所,杭州310058) 3(江苏省农业科学院植物保护研究所,南京210014) 4(南京农业大学植物保护学院,南京210095) 摘 要 建立了菊酯类农药广谱型免疫层析检测方法,可同时检测水果、蔬菜中12种甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯 氰菊酯、三氟氯氰菊酯农药残留。 以粒径20nm 的胶体金标记羊抗小鼠IgG抗体于金标垫上,分别固定包被 原(检测线,T线)、兔抗山羊 IgG 抗体(质控线,C线)于硝酸纤维素膜(NC膜)上,与吸水垫及聚氯乙烯 (PVC)底板组合成层析试纸条。10g样品经乙腈提取,PBS稀释4倍,取100滋L与菊酯类农药的单克隆抗体 混合后,直接用于试纸条检测。 结果表明,试纸条对甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯农药的裸眼 观察检测灵敏度为0.5,5.0,5.0 和5.0滋g/mL,检测时长为8~10min,采用QuEChERS方法,方法检测灵敏 度可提高16倍。 对蔬菜和水果的方法验证表明,除辣椒基质干扰呈假阳性外,其它样本的检测结果均与 GC 方法结果一致。 试纸条采用金标羊抗小鼠IgG二抗的方法,使检测结果的重现性更好、更稳定,且抗基质干扰 能力强,为菊酯类农药的累积毒性检测提供了新方法。 关键词 菊酯类农药;免疫层析试纸条;快速检测 1 引 言 拟除虫菊酯类(Pyrethroids)农药具有杀虫谱广、药效迅速、对光和热稳定、药效时间长等特点,在农 业、林业、公共卫生等领域广泛使用[1~4] ,但其对生态系统及人类健康存在危害,尤其对蜜蜂及水生生物 [5,6] 具有高毒性 。 世界卫生组织(WHO)和联合国粮农组织(FAO)对拟除虫菊酯类农药在蔬果上的残 [4,7] [8] 留制定了严格限量标准 ,我国也对该类农药制订了限量标准(GB2763鄄2014) 。 目前,菊酯类农药 检测方法主要包括色谱法、酶联免疫吸附法(ELISA)和其它生物分析方法。 色谱法主要包括气相色谱 (GC)、高效液相色谱(HPLC)、质谱法(MS)及气相色谱鄄质谱联用(GC鄄MS)或液相色谱鄄质谱联用法 (HPLC鄄MS)等[9~14]。 仪器分析方法具有灵敏度高的优点,但费用较昂贵,技术要求高,不适用现场快速 [15] 筛查大量样品 。 基于抗原鄄抗体特异性反应的方法具有检测成本低、快速、高通量等优点,其中胶体 金免疫层析技术,具有快速、简便、易判断等优点[16~18] ,适用于现场检测。 作为家族类化合物,多种菊酯农药在食品与环境中的累积毒性是严重的隐含风险,因此具有广谱识 别的抗体技术成为研究的重点。 Wang等制备的广谱型单克隆抗体可以识别6种具有间苯氧基结构的 [19] 菊酯类农药 。 Takaho等获得的多克隆抗体可识别多种I型菊酯类农药,与II型菊酯类农药无交叉识 [20] 别作用 。 而Liang等建立的多克隆抗体免疫检测方法可同时识别多