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人白血病抑制因子受体(LIFR)elisa试剂盒使用说明书.doc
人白血病抑制因子受体(LIFR)elisa试剂盒使用说明书Elisa kit规格:48孔配置/96孔配置
标准品稀释液:1.5ml×1瓶
酶标试剂:3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96)
【人白血病抑制因子受体(LIFR)试剂盒】本试剂仅供研究使用计算
说明书:1份
密封袋:1个
标准品: 2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存
样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
终止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定中水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。服务承诺:?工作时间内免费的技术咨询和指导?。为客户提供来样检测服务,最大限度实验结果的有效性(免费代测)。2-8℃| 有效期:6个月
【人白血病抑制因子受体(LIFR)试剂盒】样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1800ng/L,1200ng/L ,600ng/L,300ng/L, 150ng/L)。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻混匀分钟甩干μl,空白孔除外。μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应。450nm波长依序测量各孔的度(OD值)浓洗涤液会有析出,稀释时可在水浴中加温助溶乘以0.2IU/L - 6IU/L
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