芥菜开花调控因子SVP 与FLC 蛋白互作的结构域筛选与鉴定.pdfVIP

园 艺 学 报 2012 ，39 （12）：2395 –2403 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 芥菜开花调控因子 SVP 与FLC 蛋白互作的结构 域筛选与鉴定 * ** 汤青林，李念祖 ，宋 明 ，丁 宁，陈竹睿，刘智宇，王志敏 （西南大学园艺园林学院，南方山地园艺学教育部重点实验室，重庆市蔬菜学重点实验室，重庆 400715 ） 摘 要：为阐明芥菜开花路径核心调节子 SVP 与 FLC 相互作用的结构域，从酵母重组质粒 pGADT7SVP 、pGBKT7FLC 分别亚克隆了 5 个 SVP 截短体（SVP1 ~ 5 ）和5 个 FLC 截短体（FLC1 ~ 5 ）。 SVP1 ~ 5 与 FLC1 ~ 5 编码蛋白的结构域均分别为 MI 、MIK 、K 、IKC 和 KC 。利用酵母双杂交体系，分 别构建酵母猎物质粒 pGADT7SVP1 ~ 5 与诱饵质粒 pGBKT7FLC1 ~ 5 ，并转化对应的酵母 Y187 、Y2HGold 菌。酵母转化子 Y187 ［pGADT7SVP2 ~ 5 ］能与Y2HGold ［pGBKT7FLC ］融合，并可在选择性固体培养 基 QDO/X/A 上长出蓝色菌落，表明 FLC 能与截短体蛋白 SVP2 ~ 5 异源结合，SVP 的K 域（SVP3）可 独立作用于 FLC 蛋白。此外，Y187 ［pGADT7SVP ］× Y2HGold ［pGBKT7FLC2 ~ 5 ］也能同时激活报告 基因 AUR1-C 、HIS3 、ADE2 、MEL1 ，表明 FLC 的K 域（FLC3 ）也可独立作用于 SVP。进一步研究发现： Y187 ［pGADT7SVP3 ］× Y2HGold ［pGBKT7FLC3 ］正向杂交以及 Y187 ［pGADT7FLC3 ］× Y2HGold ［pGBKT7SVP3 ］载体互换后杂交均可相互作用，表明 SVP 的K 域（SVP 第 96 ~ 173 位氨基酸区域）与 FLC 的K 域（FLC 第 114 ~ 167 位氨基酸区域）能够异源结合，是介导 SVP 与 FLC 蛋白互作的关键结构域。 关键词：芥菜；截短体；SVP；FLC ；酵母双杂交 中图分类号：S 637.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2012 ）12-2395-09 Identification of Acting Domains Mediating the Protein Interactions Between SVP and FLC in Brassica juncea Coss. * ** TANG Qing-lin，LI Nian-zu ，SONG Ming ，DING Ning ，CHEN Zhu-rui，LIU Zhi-yu ，and WANG Zhi-min （College of Horticulture and Landscape Architecture，Southwest University ；Key Laboratory of Horticulture Science for Southern Mountainous Regions ，Ministry of Education ；Key Laboratory of Olericulture ，Chongqing 400715 ，China） Abstract ：SVP and FLC were the key regulators in plant flowering pathways. For further study on the molecular mechanism of f