虾青素合成关键酶基因bkt在苹果中的遗传转化及表达.pdfVIP

园 艺 学 报 2013 ，40 （1）：21 –31 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 虾青素合成关键酶基因 bkt 在‘Brookfield Gala ’ 苹果中的遗传转化及表达 1 1 1 2 2 1 1,* 贾东杰 ，樊连梅 ，沈俊岭 ，秦 松 ，李富超 ，刘成连 ，原永兵 1 2 （青岛农业大学园艺学院，青岛市现代农业质量与安全工程重点实验室，山东青岛 266109 ； 中国科学院海洋研究 所，山东青岛 266071 ） 摘 要：虾青素是一种氧化型酮式红色类胡萝卜素，具有更强的抗光氧化能力。将 β–胡萝卜素酮化 酶（虾青素生物合成的关键酶）基因 bkt 构建入表达载体 pCAMBIA1301 中，获得植物表达载体 p1301-bkt ， 转化根癌农杆菌 EHA105 ，获得工程菌，以黄肉苹果‘Brookfield Gala ’无菌试管苗叶片为受体，进行遗 传转化。筛选压确定结果表明：‘Brookfield Gala ’对潮霉素（Hyg ）很敏感，叶片再生最佳Hyg 选择压为 3 mg · L-1 ，试管苗增殖为4 mg · L-1 ，生根为 2 mg · L-1 ；头孢霉素（Cef ）浓度≤400 mg · L-1 时对叶片再生 芽数的影响不明显。GUS 染色、PCR 和 RT-PCR 检测结果表明，有 8 株转基因植株整合 bkt 基因并获得了 表达，其表型有红色产生；转基因植株类胡萝卜素的 HPLC 测定显示，虾青素和角黄素在叶片中的积累 量达到 2.85 和 1.79 μg · g-1 。本研究结果显示有望通过调控代谢途径，在苹果中合成虾青素，提高果实自 身的抗光氧化能力，防止日灼。 关键词：苹果；虾青素；bkt 基因；遗产转化；转化体系 中图分类号：S 661.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2013 ）01-0021-11 Genetic Transformation and Expressing of Astaxanthin Biosynthesis Genes bkt into ‘Brookfield Gala ’Apple Tree 1 1 1 2 2 1 JIA Dong-jie ，FAN Lian-mei ，SHEN Jun-ling ，QIN Song ，LI Fu-chao ，LIU Cheng-lian ，and YUAN Yong-bing1,* 1 2 （College of Horticulture，Qingdao Agricultural University，Qingdao，Shandong 266109 ，China；Institute of Oceanology ， Chinese Academy of Sciences，Qingdao，Shandong 266071 ，China） Abstract ：Astaxanthin is a kind of red and ketonic carotenoids which is reported to have stron