荧光定量RT-PCR检测LeptinmRNA基因表达方法.PDFVIP

荧光定量RT-PCR 检测Leptin mRNA 基因表达方法的建立 1 1 2 1 1∗ 张才 牛淑玲 夏成 刘国文 王哲 （1 吉林大学农学部畜牧兽医学院 ，2 黑龙江八一农垦大学动物科技学院） 摘要：根据GenBank 中瘦蛋白（leptin ）的基因序列设计合成了引物和探针，对荧光定量PCR 的方法进行了方法学的评估，建 立了TaqmanMGB荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明:所构建的PMD-18Tleptin基因荧光定量PCR检测标准品应用Taqman荧 光探针技术建立的标准曲线线性关系好（R2=0.996 ）,灵敏度和特异性高（可检测出低于10个拷贝数/µL 的样品）,准确可靠. 此方法可作为荧光定量PCR检测leptin基因的方法。 Establishment of Fluorescent Quantitative RT-PCR Method for Detection of Expression of Leptin mRNA 1 1 2 1 1∗ Zhang Cai Niu Shu-ling Xia Cheng Liu Guo-wen Wang Zhe (1.Department of animal husbandry and Veterinary Medicine of Jilin University Changchun 130062 ; 2.College Animal Science and Technology, Hei Longjiang Aug.1st Land Reclamation University,Daqing,163319;) Abstract :The probe and primers were designed and synthesized according to the leptin sequence available in GenBank. Then the real-time RT-PCR assay were developed and analysised its superiority. It is proved that the standard curve made by PMD-18Tleptin has a good linear dependence (R2=0.996), The assay is sensitivity (it could detect 10 copy/µL of plasmid DNA) and accurate. The method of FQ-RT-PCR for detecting the expression of leptin mRNA gene was established successfully. Key words: Leptin mRNA ; Fluorescent Quantitative RT-PCR 瘦蛋白（leptin ）是调节摄食和体重负反馈环中的主要信号，对机体的脂肪沉积、能量平衡等过程产生 影响。此外，瘦蛋白对能量消耗、葡萄糖代谢、胰岛素分泌也有作用[1-3] 。目前，反刍动物瘦蛋白等神经内 分泌因子的研究成为了反刍动物营养调控尤其干物质摄入和能量代谢的新方向。这为揭示奶牛能量负平衡 发生机制，缓解能量代谢障碍提供了新的对策。 人们曾运用Southern、Northern 、狭孔印迹定量分析特异核酸序，近年来出现的实时荧光定量PCR ( real time quantitative PCR) 技术实现了PCR 从定性到定量的飞跃,它具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量 准确、速度快、全封闭反应等优点。 本实验采用Taqman技术，根据GenBank发表的牛leptin 的mRNA序列，设计了特异性的引物和探针，建 立了准确，便捷检测leptin mRNA基因表达的方法。 1 材料与方法 1. 1 引物、探针的设计和