酸乳中乳酸菌的分离鉴定及其活力的测定摘要.ppt

* * * * * * * * * * * * * * Chapter 指导老师：李作美 班级：2012级食品质量与安全 学生：芦雯 学号：51206041015 目录 概述 1 2 材料与方法 3 结果与分析 4 结论 5 致谢 背景 酸奶是日常生活中的一种传统的受欢迎的发酵型的乳制品，它的营养价值含量相当的丰富，并且对人体有很好的保健功效。 意义 蒙牛冠益乳中的乳酸菌主要为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌。测定乳酸菌的OD值和产生酸能力来评定酸乳中乳酸菌的活力，对乳酸菌活力的测定，判定酸奶的最佳饮用时间，为酸奶的消费提供科学的依据，同时也对微生物做出研究。 1. 概述 材料：蒙牛冠益乳 A 设备：高压灭菌锅 CO2培养箱 电子天平 冰箱 鼓风干燥箱 超净工作台 光学显微镜 B 2. 材料与方法 材料与设备 酸奶中乳酸菌的 培养分离 酸奶中乳酸菌 菌落数的测定 生化试验鉴定 乳酸菌 产酸能力的测定 生长曲线的绘制 实验方法 1．培养基的配制 称取MRS琼脂培养基66.2g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，加热煮沸后，装入锥形瓶中，121℃高灭菌15min备用。 2．菌悬液的配制 （1）拿1支洁净的锥形瓶，加入225mL的生理盐水； （2）取7只洁净的试管，各盛9mL的生理盐水； （3）塞上棉塞，用报纸包裹扎紧后，放入103kPa、121℃高压蒸汽灭菌20min； （4）用玻璃棒将酸奶样品搅拌均匀，吸取酸奶25mL，加入放有225mL无菌生理盐水的锥形瓶中，充分振摇，让酸奶样品均匀散布，这就是10-1的酸奶样品稀释液； （5）将7支盛有9mL生理盐水的无菌试管，分别标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8，利用无菌移液管吸取10-1的酸奶样品稀释液1mL，分别加入盛有9mL无菌生理盐水的试管中，再次稀释，得到10-2稀释液，同理得到 10-3-10-8的样品稀释液。 3．倒平板 把经高温高压灭菌的MRS琼脂培养基冷却到45℃左右，按无菌操作法倒7只平板，倒平板时注意量的把握，浅浅的一层，待凝固。 4．分离方法 用一支1mL无菌移液管分别吸取10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7和10-8的稀释菌悬液各1mL，分别接种在与之相对应的7个无菌平板中，每个平皿放稍许；马上用无菌玻璃涂棒将样品菌液均匀地涂布在平板，放置一段时间后，将之倒置，最后放入37℃恒温箱中培养48h。 5．菌落观察 恒温培养48h过后，取出培养平板；观察培养基内菌落的形态，找出乳酸菌菌落。 6．镜检 选取一块干净的载玻片，在载玻片的中央滴加一滴生理盐水，在无菌操作法的环境下，用接种环挑取少量乳酸菌涂片；结晶紫初染→碘液媒染→乙醇脱色→番红复染，干燥后用油镜观察。 生化试验鉴定乳酸菌 糖发酵试验 试验方法：在无菌操作的环境下,用接种环挑取一定的量培养基上的乳酸菌,使之接种在发酵液体的培养基的试管中。在完成接种任务后,将乳酸菌培养基试管放入培养箱中培养。每天定时观察试验结果,观察培养基内颜色有没有发生变化，即有没有产酸。查看小倒管中有没有气泡产生,若出现微小气泡，也可视为产气阳性。我们有的时候还能观察到接种的乳酸菌有没有动力,如果有动力,乳酸菌培养物就能飘散着生长在培养基中。 将麦芽糖、七叶苷、乳糖、蔗糖和葡萄糖五种糖的发酵培养基，分别加入试管中，高度约为整个试管的三分之二。分别用接种环挑取MRS琼脂培养基中的乳酸菌的疑似菌落接种在这几个试管中，放入二氧化碳培养箱中培养2-3d（37℃）。 各种生化指标的鉴定，获得乳酸菌的生化特性。 酸奶中乳酸菌菌落数的测定 （1）配置酸奶溶液 吸取1ml酸奶于一支标有10-1标号的无菌生理盐水中配成1：10的稀释液。 （2）稀释 吸取lmL混合均匀的1：10的酸奶稀释液加入标有10-2标号试管内，同理作10倍递增稀释液。 吸取10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8八个梯度的酸奶稀释液，依次放入相应的无菌平皿中，每个平皿放浅浅的一层。 (3) 倒平板． 平皿中加入稀释液后，马上把冷至45℃左右的改良TJA培养基加入平皿中，用1mL无菌生理盐水作空白对照，等待培养基凝固之后，把平板倒置，放入恒温培养箱中培养，温度在37℃左右，培养时间为48h。 (4) 观察计数： 观察乳酸菌菌落的形态特点，把菌落数在30-300之间的平板挑选出来，开始计数。则1mL检样中乳酸菌数为：(N1+N2) X A/2 注： 单位是：cfu/mL N1、N2-------平行平皿中乳酸菌落个数 A--------稀释倍数 挑选出乳酸菌生长繁殖适宜的三个培养基平