天津医科大学抗体纯化与鉴定技术-09.pptVIP

抗体纯化与鉴定技术 临床免疫学教研室 李会强 教授 抗体纯化的目的 去除： 杂抗体（交叉反应抗体） 杂蛋白（提纯IgG及其片段） 盐析法粗提丙种球蛋白 实验原理： 蛋白质溶解度在一定范围内随盐的浓度变化而变化。在低盐浓度下溶解度随盐的浓度升高而增加，当盐浓度达到一定水平时，其溶解度又以不同程度下降并先后析出。 实验原理： 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。 实验原理： 同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 主要试剂： 饱和硫酸铵溶液 温度系数小，溶解度大（767 g/L） 不同饱和度析出蛋白质会依次析出； 价格便宜； 不容易引起蛋白质变性； 主要试剂： 饱和硫酸铵溶液 硫酸铵800g~850g溶于 1000ml H2O加热至绝大部分溶质溶解为止，趁热过滤，置室温过夜，然后以28％NH4OH调pH至7.0。 0.01Mol/L pH7.4 PB 操作： 技术路线 操作： 注意事项 硫酸铵的质量 饱和硫酸铵溶液配制 蛋白质浓度 盐析过程 脱盐 操作： 葡萄球菌蛋白A亲和层析提取IgG 实验原理： 蛋白A（ Pro