植物吲哚乙酸（iaa）酶联免疫分析（elisa） 试剂盒使用 ... - igem 2015.pdf

ELISA ELISA 植物吲哚乙酸（IAA）酶联免疫分析（EELLIISSAA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其 它相关样本中吲哚乙酸（IAA）含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物吲哚乙酸（IAA）水平。用纯化的植物吲哚 乙酸（IAA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物吲哚乙酸 （IAA），再与HRP 标记的植物吲哚乙酸（IAA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合 物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作 用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物吲哚乙酸（IAA）呈正相关。用酶标仪 在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中植物吲哚乙酸（IAA）浓 度。 试剂盒组成： 试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：3600pmol/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存 显色剂A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存 显色剂B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1 瓶 （20ml×30 倍）×1瓶 2-8℃保存 标本要求： 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二 孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl， 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混 1 匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加