《病原生物学与免疫学》病原生物学与免疫学实验指导.docVIP

病原生物及免疫学实验指导 实验目的及实验室规则 一、实验目的 二、实验室规则 实验一 一、显微镜油镜头的使用和保护法（操作） 二、细菌的基本形态和特殊结构观察（示教） 三、细菌涂片和革兰染色法（示教） 实验二 一、培养基的制备原则和培养基种类介绍（示教） 二、细菌接种法 三、细菌的生长现象及代谢产物的观察(示教) 实验三 一、空气、咽喉部细菌的检查(操作) 二、常用消毒灭菌器和滤菌器(示教) 三、紫外线杀菌试验(示教) 四、皮肤消毒试验(操作) 五、药物敏感试验(纸片法，示教) 实验四 一、免疫细胞 二、豚鼠过敏反应(示教或观看录像) 三、抗原抗体反应 四、常用生物制品(示教) 实验五 一、化脓性球菌 二、肠道杆菌及其他细菌 实验六 一、病毒包涵体的观察(示教) 二、乙肝病毒酶联免疫吸附试验结果观察(示教) 三、螺旋体、立克次体形态观察(示教) 四、真菌形态和培养物观察(示教) 实验七 一、蠕虫成虫、虫卵及幼虫形态观察(示教) 二、中间宿主标本观察(示教) 三、粪便中寄生虫检查 实验八 医学原虫形态观察(示教) 病原生物及免疫学基础实验 实验目的及实验室规则 一、实验目的 病原生物及免疫学基础实验是本课重要的组成部分，通过实验，加深对基础理论知识的理解；通过实验操作，掌握有关的基础操作技能和无菌技术，建立无菌观念；通过正确地观察和分析实验结果，培养学生实事求是的科学态度、严肃认真的工作作风及分析和解决问题的能力。 二、实验室规则 （一）进入实验室要穿工作服，离开室前脱下并折放好，工作服要经常清洗，保持洁净。 （二）非实验室必备的物品不准带入实验室。带进实验室的必要教材和文具，要远离操作部位。 （三）实验室内绝对禁止饮食、吸烟或舔铅笔等。 （四）实验室内保持肃静，禁止谈笑和高声说话，以利集中精神完成实验操作。 （五）凡具有传染性的培养物、带菌材料、动物、器具等，均按要求处理，不得随便乱放或用水冲洗。实验室内的任何物品不得携出室外。 （六）实验中一旦发生意外，如划破皮肤，细菌污染实验台、地面、手或衣物时，应该及时报告老师，按有关程序妥善处理。 （七）爱护公物、节约实验材料，如损坏实验器材时，应向老师报告，进行登记。 （八）保持实验室内清洁整齐。实验完毕应整理实验物品、清理桌面、清扫实验室，并检查水电和门窗。 （九）实验完毕后，需用消毒液泡手，再用清水冲洗，然后离开实验室。 实 验 一 一、显微镜油镜头的使用和保护法（操作） （一）使用油镜头时，不要将镜台倾斜，以免镜油流出污染镜台。 （二）2、以自然光为光源时，用平面反光镜；以灯光为光源时，用凹面反光镜。 （三）3、将载玻片标本放在载物台上，用移动器或固定夹固定。先用低倍镜对光，然后转换油镜头，放大光圈和升高聚光器。 （四）在标本上滴一滴香柏油，然后眼睛从侧面观察，慢慢将镜头下降至镜油内，但不要碰到载玻片，以免损伤镜头。 （五）以左眼注视目镜，先用粗调节器将油镜头缓慢调离玻片至有模糊物象时，然后用细调节器调至物象清晰。观察标本时，宜两眼同时睁开，以减少眼睛疲劳。最好用左眼看镜筒，右眼配合绘图或记录。 （六）使用完毕，立即用擦镜纸（切不可用手、布或其它纸类）擦去香柏油。如果镜头上油已干，可用蘸少许二甲苯的擦镜纸将镜头上的镜油擦干净，再用擦镜纸将残存的二甲苯擦干净。 （七）最后，将物镜转成“八字形”，反光镜竖起，下降镜筒和集光器，罩好镜套，放入镜箱内。 （八）使用显微镜要轻拿轻放，平时放置要注意通风干燥，防霉防晒。 二、细菌的基本形态和特殊结构观察（示教） （一）基本形态观察 1.球菌 金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、脑膜炎奈瑟菌。 2.杆菌 伤寒沙门菌、痢疾志贺菌、炭疽芽胞杆菌。 3.弧菌 霍乱弧菌。 （二）特殊结构观察 1.荚膜 肺炎链球菌的荚膜。 2.鞭毛 伤寒沙门菌的鞭毛 3.芽胞 破伤风梭菌的芽胞 （三）实验报告 绘出镜下所见细菌基本形态和特殊构造图 三、细菌涂片和革兰染色法（示教） （一）细菌涂片制作 涂片—干燥—固定。具体操作程序为：以无菌操作将生理盐水各一滴滴于载玻片两侧，用接种环分别挑取葡萄球菌和大肠埃希菌菌落少许涂于载玻片两侧的生理盐水中，并研成均匀混浊的菌液（如系液体标本，则不需加生理盐水，可直接涂于载玻片上）。置室温中自然干燥，也可将涂膜背面置火焰上方不烤手的高处略加烘烤，但切不可将涂片膜烤焦。将载玻片的背面快速通过酒精灯火焰温度最高处三次，予以固定。 （二）革兰染色法 将制备好的标本片按下列步骤进行染色； 1.初染 滴加结晶紫染液初染1分钟，水洗。 2.媒染 滴加卢戈碘液媒染1分钟，水洗。 3.脱色 滴加95%乙醇脱色，摇动标本片至无紫色脱下为止，约0.5至1分钟，水洗。 4.复染 滴加稀释