热休克蛋白HSP65抑制肿瘤新生血管形成药效学实验研究.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（１１）：８１３ 热休克蛋白ＨＳＰ６５抑制肿瘤新生血管形成 的药效学实验研究 １，２ ２ １ ２ 谢燕飞 　陈颖瑛 　左爱仁 　曹荣月 （１江西中医学院基础医学院　南昌　３３０００４　２中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室　南京　２１０００９） 摘要　观察卡介苗来源的热休克蛋白ＨＳＰ６５对肿瘤新生血管形成的影响并初步探讨可能的作用 机制。通过基因工程手段获得纯化的重组ＨＳＰ６５蛋白，与弗氏佐剂联合给药。构建皮内接种黑 色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞的小鼠模型。通过在肿瘤接种前长期的多次给药，发现Ｈｓｐ６５能够在小鼠体 内诱导高滴度的特异性抗体，并显著抑制肿瘤周围新生血管的形成，抑制率达到４１．０１％。经免 疫组化技术对肿瘤表面ＶＥＧＦ的表达水平进行分析，结果表明ＨＳＰ６５免疫组ＶＥＧＦ表达量明显 下降，提示了该疫苗作用的可能机制。 关键词　ＨＳＰ６５　肿瘤　新生血管 中图分类号　Ｑ７８９ 　　卡介苗ＨＳＰ６５来源于结核分枝杆菌，是热休克蛋 排出代谢物。而肿瘤血管的生成是一个极其复杂的过 白６０家族的成员，也是卡介苗中最主要的抗原成分， 程，受到多种细胞因子的调节。其中缺氧诱导因子１ 它的免疫原性很强，能刺激机体同时产生体液免疫和 （ＨＩＦ１）作为转录激活因子，是恶性肿瘤诱导新生血管 ［１］ 细胞免疫 。同时 ＨＳＰ６５与哺乳动物来源的ＨＳＰ６０ 形成的重要调控因子，ＨＩＦ１通过增强下游靶基因 具有高度的同源性，因此，机体诱导的特异性抗 ＨＳＰ６５ ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＰＩＧＦ等血管生成诱导因子的表达，影响 抗体可能会和ＨＳＰ６０发生交叉免疫应答。研究也已证 ［１３］ 血管生成，促进肿瘤细胞的生长和发育 。ＨＳＰ６０能 实，机体产生的特异性抗 ＨＳＰ６５抗体确实能够与内皮 ［１４１５］ 通过与 ＴＬＲ４受体结合而激活 ＨＩＦ１ ，这可能是 细胞、巨噬细胞及平滑肌细胞表面表达的ＨＳＰ６０发生 ＨＳＰ６０促进血管生成的机制。既然ＨＳＰ６５免疫激活的 ［２３］ 交叉免疫反应 。 特异性抗体能够与哺乳动物 ＨＳＰ６０发生交叉免疫反 　　ＨＳＰｓ作为一种肿瘤相关抗原（ＴＡＡ），在正常的未 应，就很可能通过与ＨＳＰ６０结合，屏蔽ＴＬＲ４信号通路， 应激细胞有少量表达，但在恶性肿瘤细胞中， ＨＳＰｓ呈 从而抑制肿瘤新生血管的生成。 ［４］ 现为持续性的高诱导表达 ，在多种人类肿瘤组织中， 　　本文通过从ＢＣＧ中扩增 ＨＳＰ６５基因，并插入到原 ［５］ ［６］ ［７］ ［８］ 如胃癌 、卵巢上皮癌 、骨肉瘤 、结肠直肠癌 、前 核表达载体ＰＥＴ２８ａ中，构建了ＨＳＰ６５表达克隆ｐＥＴ ［９］ ［１０］ ［１１］ 列腺癌 、胰腺癌 、口腔鳞状细胞癌 ，均存在 ２８ａＨｓｐ６５。在大肠杆菌中表达纯化后获得 ＨＳＰ６５蛋 Ｈｓｐ６０的持续过量表达。而ＨＳＰ６０与肿瘤的转移扩散 白，与弗氏佐剂混合制备成相应的蛋白疫苗。在肿瘤 ［１２］ 及血管生成有关 。 的选择上，选用了对卡介苗高度敏感的高转移性黑色 　　新生血管与肿瘤的发生、发展、转移有着密切的联 素瘤Ｂ１６／Ｆ１０，通过皮内注射细胞，获得