抗鸭乙肝病毒犮狅狉犲蛋白单克隆抗体的制备与鉴定剖析.PDF

第 卷第 期 西 安 交 通 大 学 学 报 （医 学 版 ） ３４ ６ 犞狅犾．３４犖狅．６ 年 月 （ ） ２０１３ １１ 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻犪狀犑犻犪狅狋狅狀 犝狀犻狏犲狉狊犻狋 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 犖狅狏．２０１３ 犵 狔 抗鸭乙肝病毒犮狅狉犲蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 １ ２ １ １ １ 王亚文 ，刘正稳 ，张 琳 ，冯 艾 ，王 威 ， 　 　 　 ３ ３ １ 王全颖 ，杨广笑 ，惠凌云 （ 西安交通大学医学院第一附属医院检验科，陕西西安 ； 西安交通大学医学院第一附属 １． ７１００６１２． 　 医院传染科，陕西西安 ； 西安华广生物工程有限公司，陕西西安 ） ７１００６１３． ７１００４０ 　 　 摘要：目的 制备抗鸭乙肝病毒 蛋白的单克隆抗体并进行鉴定。方法 扩增鸭乙肝病毒（ ） 基因 ｃｏｒｅ ＰＣＲ ＤＨＢＶ ｃｏｒｅ 　 　 片段，构建表达载体 （ ）／ 。转化诱导表达融合蛋白，用 ２＋ 亲和柱纯化目的蛋白。免疫 ／小 ｐＥＴ２８ａ＋ ＤＨＢＶｃｏｒｅ Ｎｉ Ｂａｌｂｃ 鼠，取脾细胞与 ／ 骨髓瘤细胞融合， 筛选，采用有限稀释法筛选单克隆杂交瘤细胞并进行细胞克隆。体内 ＳＰ２０ ＥＬＩＳＡ 诱生法大量制备单克隆抗体，进行抗体的特异性、效价和亚型的鉴定。结果 成功构建表达载体 （ ）／ ＥＴ２８ａ＋ ＤＨＢＶ 　 ｐ ，并表达 蛋白。获得 株稳定分泌抗 抗体的杂交瘤细胞株，分别为 和 ，细胞培 ｃｏｒｅ ＤＨＢＶｃｏｒｅ ２ ＤＨＢＶｃｏｒｅ ２Ｄ７ ５Ｇ１０ 养液抗体效价为 和 。选择 细胞株制备单克隆抗体，小鼠腹水抗体效价可达 。鸭肝组