血液系统疾病动物模型制备—培训课件.ppt

* ? 发生机制 主要表现 实验室检查 高凝期 凝血系统与Pt激活→IIa↑→微血栓形成 血液处于高凝状态 凝血时间缩短 粘附性↑ 消耗性低凝期 凝血因子和血小板因消耗而减少 血液处于低凝状态 有出血表现 血小板计数↓ 凝血酶原时间↑ 纤维蛋白原含量↓ 出血时间↑ 凝血时间↑ 继发性纤溶亢进期 产生大量纤溶酶；纤维蛋（原）降解产物形成 明显出血 FDP↑ 凝血酶时间↑ 3P试验（+） 血小板 纤溶系统激活 高凝状态 微血栓 低凝状态 DIC的发生发展机制 多发性出血 实验对象：成年家兔，雌雄随机 1.家兔DIC模型的复制 造模原理 正常体内循环血液中不含组织因子，当组织损伤或内皮细胞和白细胞激活时，组织因子能释放或暴露于循环血液启动外源性凝血过程。兔脑粉含有组织因子，静脉注射兔脑粉后通过激活外源性凝血途径引起DIC. 兔脑粉浸液的制备： 健康成年家兔安乐处死后,即刻开颅摘取兔脑，除去血管、脑膜和其它结缔组织，用PBS洗净后，置于研钵中伴丙酮研磨成粥状悬液，静置数分钟后弃上清液，再加入丙酮研磨重复前述步骤多次，直至脑组织完全脱水成白色粉末，置4oC保存待用。 造模方法： 称重后，用20%乌拉坦4ml/kg耳缘静脉注射麻醉 动物 用生理盐水配制4％兔脑粉溶液，按2ml／kg体重计算兔脑粉溶液，加生理盐水稀释至20m1后，由耳缘静脉缓慢注入（10min）。 分别于注入兔脑粉溶液前15min、注入后15min和45min，记录家兔的血压和呼吸，并取血置于有肝素的注射器中，以测定3P试验、PT、纤维蛋白原、血小板计数。 造模方法 复制DIC模型： 凝血酶原时间(PT)测定 ①P试液配制：取兔脑粉0.2g，加入5ml NS充分混匀，置C37oC恒温水浴箱内孵育1hr，孵育期间用玻璃棒搅拌3至4次，孵育后混匀、离心(1000rpm x 5min）, 取上清液与等量氯化钙（0.025mol／L）溶液混匀。 取被检血浆0.1ml，置于小试管内放于37℃水浴中。 ②取待测血浆0.1ml加入P试液0.2ml，轻轻地侧动，直至液体停止流动或出现粗颗粒，即为凝血酶原时间. ③重复3次，取平均值,家兔正常值为6～8sec。 造模方法 检查急性DIC的几种血液学常规方法： 血小板计数 吸取20μl全血加入到0.38ml血小板稀释液中混匀，用滴管将上述混悬液一小滴滴入血球计数板内，静置15min后，用高倍镜计数。数5个方格内之血小板数，乘以1000，即得每立方毫米血小板数。 造模方法 鱼精蛋白副凝实验(3P实验) ①取全血置于EP管中，离心（5000rpm x 3min）后，取上清液即血浆。 ②取血浆0.4ml置于试管中，加入0.1ml 1%硫酸鱼精蛋白液混匀。 ③室温下静置30min后摇动试管，出现白色纤维或凝块者为阳性，均匀浑浊而没有出现白色纤维者为阴性。 造模方法 鱼精蛋白 游离单体(FM) 多聚体凝块(Fbn) Fbg FM Fbn Ⅱa XⅢa FDP PLn PLn FM—X (可溶性复合物) (A, B, C X,Y) 3P试验: 血浆鱼精蛋白副凝试验（plasma protamin paracoagulation test） 血清纤维蛋白(原)含量测定(饱和盐水法) ①取血浆0.5m1置于12X100mm的试管中，加入饱和氯化钠溶液4.5m1，充分混匀，置于37℃水浴中孵育3min，取血后再次混匀，用721型分光光度计比色，测定光密度. ②以生理盐水代替饱和氯化钠溶液，进行同样操作作为对照。 ③对照管调零点，测出光密度(波长520mm)后，按下式计算纤维蛋白原含量： 测定管光密度 ×1000=mg% 0.5 造模方法 动物死后观察各脏器 的 变 化 造模方法 尸检 三.贫血的动物模型 贫血是指人体外周血红细胞容量减少，低于正常范围下限的一种常见的临床症状。 1、缺铁性贫血动物模型 造模原理： 缺铁性贫血（iron deficiency anemia，IDA）是指各种原因引起的缺铁导致红细胞生成减少而导致的贫血。通过低铁饲料喂养动物使铁摄入减少，外加多次少量放血使铁丢失，造成体内铁的缺乏。