细胞分选技术讲述.ppt

StemCell Technologies Inc. 细胞分选产品 细胞分选和基本原理 细胞分选是把一种细胞从多细胞样品中分离出来 用抗体标记细胞，同时被用的抗体被萤光标记或连接免疫磁珠或其它 利用萤光和免疫磁珠的特性来分离细胞 细胞分选常用方法 密度梯度离心(Ficoll)离心 抗体标记分离 免疫密度离心 免疫磁珠 流式 正选和负选的比较 StemCell Technologies Inc.的细胞分选原理 利用抗体四聚体(Tetrameric Antibody Complex, TAC)来分选细胞 适用于人的全血细胞样品 是一种负选方法 基本原理：抗体标记和免疫密度离心法 需要的仪器：离心机 分选的过程 的密度分离液DM-L 为了最大限度回收淋巴细胞，StemCell专门研制了一种适合RosetteSep?的密度分离液—— DM-L DM-L 的密度：1.081 g / mL DM-L 的渗透压与人外周血的渗透压相同(iso-osmolar) 适用于以下的淋巴细胞分选: CD3+ T cells - CD8+ T cells CD4+ T cells - B cells 新型，高效，易行的免疫磁珠分选技术 新：不用柱子，只需用磁极，所用的磁珠很小 高效：效率-分选过程不用洗细胞(省时省力); 效果-分选的细胞纯度高 易：操作过程简单易行 广：可做正选和负选 适应性强：在理论上可以分选任何一种细胞 的细胞分选过程 正选资料 负选资料 可正选或去除任何一种细胞 PE 标记的抗体分选Kit FITC 标记的抗体分选Kit Biotin 标记的抗体分选Kit 细胞分选常见的问题 分选方法的选择 样品种类 样品数量 每次需要分选的细胞数 常见问题 样品的前处理 Ficoll 离心机 全血和单采的细胞 细胞计数 稀释液 细胞数 常见问题 分选过程中 细胞浓度 缓冲液 细胞混匀动作要点 Calculating Purity and Recovery % Purity = # desired cells in enriched fraction x 100 # total nucleated cells in enriched fraction = % of total events in the desired cell gate (FACS profile) % Recovery = # desired cells in enriched fraction x 100  # desired cells in start = (% purity in enriched) x (total nucleated cells in enriched) x 100 (% purity in start) x (total nucleated cells in start) FACS Gate panNK+ Selected from Mo Spleen Data analysis Product Information Available /cn_index.asp 杭州百通生物技术有限公司 Catalogue Combined Procedure / PIS / Product Profile Technical Bulletins Start NK+ Selected 的技术要领 细胞稀释后，用吸管混匀细胞（不要倒置试管） 倒出未标记的细胞时，让液体连续流淌，试管停留在最后的位置约2秒钟，但不要刻意抖下最后一滴细胞液 SpinSep procedure is very simple. Basically add antibody cocktail, incubate, and layer the sample over SpinSep Density Medium. Then Spin and collect your cells from interface. One important thing is that SpinSep Density Medium is special medium only for SpinSep. In other words, you cannot use any other density medium to replace. Centrifugation speed? Collect entire volume? What Lin-/ c-Kit+/Sca 1+ 4.3? Lin-/ c-Kit+/Sca 1+ 3.9? Mouse T CD90, why don