JHBP 和JHAMT基因RNA-based 转基因棉花评价报告.docxVIP

JHBP 和JHAMT基因RNAi-based 转基因棉花评价报告以表达JHBP 和JHAMT基因dsRNA的转基因棉花为试验材料，以陆地棉W0和以表达GFP基因dsRNA的转基因棉花为对照，研究了室内条件下转基因棉花对标靶害虫棉铃虫的抗虫效果，以及田间条件下对棉田节肢动物群落的影响，具体包括调查靶标害虫、非靶标害虫和天敌的田间变化动态。室内条件下转基因棉花对棉铃虫的抗性鉴定（一）研究材料与试验方法1、试验材料供试昆虫：室内不接触任何药剂饲养的棉铃虫品系的初孵幼虫供试棉叶：转基因植株和对照植株上采取的新鲜棉叶WO: 采自作为对照的陆地棉W0GFP: 采自作为对照的表达GFP基因dsRNA的转基因棉花JHBP1-1和JHBP1-4：采自表达保幼激素结合蛋白基因（JHBP1）dsRNA的不同克隆的转基因棉花JHAMT-389：采自表达保幼激素甲基转移酶（JHAMT）dsRNA的转基因棉花2、试验方法从田间健康的棉花植株上采取新鲜的倒三叶，放置在冰盒中直至使用。将棉叶表面的水分用吸水纸吸干并将叶柄处剪成斜面，包裹以湿润的脱脂棉球（棉球水量不宜过多），之后平整地放置于培养皿内。每张棉叶接种5头棉铃虫初孵幼虫，后覆盖3层吸水纸，盖紧培养皿盖子，防止幼虫逃逸。每10张叶片为一个重复，每个处理设3个重复。将接种好的棉铃虫置于26±1℃恒温，光周期（14L：10D）的光照养虫室进行观察。每天对脱脂棉球加水以保证其湿润。接种后第六天更换新鲜叶片，饲养至第10天，并记录第6天及第10天接种棉铃虫的死亡率、生物量、平均体重和叶片的受损情况，并计算相应的校正死亡率。校正死亡率(%)=(处理组死亡率-对照组死亡率)/(100-对照组死亡率)×100为保证数据的稳定性及可靠性，分别于2012年、2013年和2015年进行重复试验，试验内容和检测指标均采用同一标准。（二）结果与分析我们对选取的针对两个保幼激素相关基因的三种转基因棉花材料进行了室内的生物测定，从三年的室内生测数据可以看出不论是接种后第6天还是第10天，与对照相比，喂食这几种转基因棉花叶片的棉铃虫，死亡率显著上升，存活幼虫的体重也明显减少，棉铃虫的生长发育收到了严重抑制（表1-1，图1），说明这三种转基因棉花在室内条件下对棉铃虫都有较好的防治效果，尽管不能完全杀死棉铃虫，但是能够显著的抑制其生长。此外，通过比较接种后第6天和第10天的棉花叶片的受害情况（图1-2），我们不难看出，相比对照品种，这3种转基因棉花的受害情况都有不同程度的减轻，这也是其抗虫性的一个有力体现。W0GFPJHBP1-1JHBP1-4JHAMT-3896d10d6d10d6d10d6d10d6d10d平均体重 (mg)11.37±1.17a73.83±0.74A11.18±0.13a72.80±1.30A3.58±0.41b27.63±2.94B4.13±0.39b23.60±1.97B3.18±0.19b25.43±1.10B2012死亡率 (%)5.33±1.15b5.33±1.15C4.67±1.15b9.33±1.15C17.33±2.31a38.67±1.15A18.00±2.00a28.67±1.15B16.00±2.00a30.67±3.06B校正死亡率 (%)0.00±0.00b0.00±0.00C-0.67±1.21b4.26±1.22C12.71±2.44a35.23±1.22A13.41±2.11a24.67±1.22B11.30±2.11a26.79±3.23B生物量(mg)53.47±4.92a348.87±9.29A52.95±1.15a329.63±5.56A15.82±0.22b83.70±7.81B16.98±1.81b84.67±9.11B13.09±1.09b87.43±7.80B平均体重 (mg)11.97±0.13a75.47±0.60A11.27±0.42a71.48±3.25A3.60±0.25b25.73±1.79B3.98±0.21b23.87±1.88B3.36±0.56b26.77±2.64B2013死亡率 (%)2.00±2.00c7.00±4.36C4.00±0.00bc9.22±1.07C18.57±3.09a44.00±3.46A14.67±5.03a28.67±6.43B12.67±3.06ab27.11±0.96B校正死亡率 (%)0.00±0.00b0.00±0.00C2.04±0.00ab2.39±1.15C17.01±3.12a39.79±3.72A12.93±5.14a23.30±6.91B10.88±3.12ab21.62±1.03B生物量(mg)58.58±0.74a350.44±19.04A53.89±2.28a324.75±12.97A14.