亲和层析柱使用说明.PDF

亲和层析柱使用说明 货号 名称 规格 说明 DS0101 亲和层析柱 1ml 含 1 个空管柱，上 DS0103 亲和层析柱 3ml 下盖和2 个筛板（亲 DS0106 亲和层析柱 6ml 水性，孔径50um） DS0110 亲和层析柱 10ml DS0130 亲和层析柱 30ml DS0150 亲和层析柱 50ml 一、一、产品说明产品说明 一一、、产品说明产品说明 亲和层析是利用生物分子间所具有的专一 亲和力而设计的层析技术。它是利用生物分子间 存在很多特异性的相互作用（如抗原和抗体、酶 和底物或抑制剂、激素和受体等），通过将具有 亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质 上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另 一个分子进行分离纯化。 索莱宝提供的亲和层析柱工具可应用于如下方 面： ①纯化重组蛋白；②纯化抗原和抗体；③纯化多 肽；④纯化 DNA ；⑤糖蛋白的纯化；⑥纯化磷 酸化蛋白和肽；⑦DNA 结合蛋白的纯化；⑧去 除内毒素，等。 亲和层析柱空柱管的材质为医疗级的聚丙烯，这种工程材料通过大量的应用证明具有清 洁无毒，不与生物分子结合和低溶解度的优点。 亲和层析柱空柱所用的筛板是选用纯净的UHWM-PE （超高分子量聚乙烯）为原料，经 独特的工艺加工而成，具有亲水性。筛板在装填时安置在填料基质的上下端，以阻挡昂贵的 基质渗出。亲水性筛板采用了领先的亲水性UHWM-PE 生产技术，该筛板能保证使用重力 法时的流速为1-2ml/分钟或1-2 滴/秒。同时，该筛板和其它同类产品相比，不会由于亲水性 基团的引入而对蛋白质产生吸附。另外，该亲水性筛板在使用过程中不易形成气泡，气泡会 使流速降低，液体通过基质不均匀。 二、二、产品产品应用应用 二二、、产品产品应用应用 1，抗体纯化 纯化抗体一般用Protein A 作为纯化的配体，也可以用Protein G 或Protein L 或异源性抗 体作为配体。 2 ，小分子物质提取（以提取黄曲霉毒素M1 为例） 试样通过免疫亲和柱时,黄曲霉毒素M1 被提取。亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1 特异性 单克隆抗体交联在固体支持物上,当样品通过亲和柱时,抗体选择性的与黄曲霉毒素M1 抗原) 键合，形成抗体一抗原复合体。用水洗柱除去柱内杂质,然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄 曲霉毒素 M1,收集洗脱液。用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素 M1 含量。 3，重组蛋白纯化 近年来，随着生物技术，特别是基因工程技术的迅猛发展，重组蛋白表达和纯化越来越 容易。常用的重组蛋白表达策略是把蛋白与亲和标签融合表达，利用亲和标签一步纯化出目 标蛋白。此方法无需了解蛋白质的生化特性或生理活性，就可通过带标签的重组融合蛋白选 择性地与层析基质上的配体结合，从而得以纯化任何蛋白质。此方法与常规的层析方法不同 之处在于，无需针对不同的蛋白质开发特定的配体和方法。采用保护蛋白质结构和功能完整 性的温和条件，可一步亲和层析从粗提物中纯化出重组蛋白，纯度可达90 ％以上。 亲和标签已成为后基因组学时代纯化重组蛋白常用手段。亲和标签系统一般具有以下特征： (a)一步的吸附纯化；(b)对三级结构和生物活性影响小；(c)可方便且专一的去除以产生天然 蛋白质；(d)在纯化过程中重组蛋白的分析简便准确；(e)适用于大量的不同蛋白质。但是没 有哪个标签是完美的，只能根据实际需要去自己筛选，下表是分的标签以及纯化的方案。 三、三、装装柱步骤柱步骤：： 三三、、装装柱步骤柱步骤：： 1， 装下筛板 把筛板浸泡于水中，用超声或振荡赶掉筛板空隙中的空 气，备用。用装柱工具把筛板顶入柱体，再用装柱工具把筛 板平推到柱体底部。 2 ， 加装填料 将填料和适量的缓冲液加入小烧杯中，制成混悬