结核诊断骨科科会—培训课件.pptVIP

Rv3874,rv3875,非洲，牛。堪萨斯，海分枝，苏而加。 现象：同一耐药患者在治疗的不同阶段，药敏试验结果发生了改变？ 1、检测方法本身的可靠性：药物的稳定性，浓度，菌株的生长状况。 2、耐药发生了演变：原发耐药和继发耐药 3、混合感染问题：感染了多种分枝杆菌 人体对于结核分枝杆菌感染的免疫反应主要是细胞免疫。 T淋巴细胞和巨噬细胞的作用关系到感染的进程和演变。 巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌后，就会把它们消化成大小不一的片断。特异片断(抗原肽)与巨噬细胞和其他抗原递呈细胞的主要组织相容性复合体相结合，表达于巨噬细胞表面，并递呈给T细胞。 特异性CD4 T细胞能产生特征性淋巴因子，包括一种能够刺激T细胞增殖的IL-2和γ-干扰素。 IGRA就是检测被结核菌激活的记忆T细胞释放出γ-干扰素水平。 2.2 TB-IGRA APC T cell IFNg IGRA应用 2.3 HAIN技术得到全面认可 HAIN技术 效果评价 中国疾控中心结核国家参比实验室实验数据 分枝杆菌的分类： 一、缓慢生长菌群 1．结核菌群：包括人型结核杆菌，牛型结核杆菌，非洲分枝杆菌，田鼠分 枝杆菌。 2．I 群光产色菌。如：堪萨斯、海分枝杆菌等。 3．Ⅱ群暗产色菌。如：瘰疠、戈氏分枝杆菌。 4．Ⅲ群不产色菌。如鸟型、胞内、溃疡分枝杆菌等。 二、 迅速生长菌 即Ⅳ群菌，包括偶发、龟、耻垢分枝杆菌等。 三、需要特殊营养菌 包括麻风分枝杆菌、鼠麻风分枝杆菌、副结核分枝杆菌。 Runyon分类法中的 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ群分枝杆菌又称为非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacteria ，NTM) 经过了全球四年的观察，HAIN技术已经是非常成熟的 技术并得到同行的认可与好评。 Hain 技术可以在二个工作日检测RIF和INH的耐药 可以进一步分析18种常见非结核分枝杆菌。 缺点：与960液体快速药敏相比，该方法药敏结果具有假阴性可能，占10%左右。这是所有分子诊断技术的原理缺陷。 2.4 RNA恒温扩增技术（TB-SAT） P 脱氧核糖 含氮碱基 DNA的基本单位----脱氧核糖核苷酸 P 核糖 含氮碱基 RNA的基本单位----核糖核苷酸 DNA和RNA的主要区别就在糖基。 DNA是双螺旋结构，RNA是单螺旋结构 DNA很稳定，RNA很不稳定。 结核RNA在细胞中拷贝数很多 使用rRNA为靶标，大大提高了取样效率和检测灵敏度。 一个或几个拷贝DNA 104核糖体RNA (rRNA) 16S rRNA 23S rRNA DNA扩增技术（PCR）用于病原体检验的不足 “死菌检测也阳性”，与临床相关性差 基因与表型不吻合 (耐药检测) 不能区分“潜伏感染”“活动性感性” 交叉污染问题（三个房间） 变温检测，对仪器要求高 反应抑制问题（Taq酶） RNA扩增技术检验的优势 灵敏度高：RNA 拷贝数≥ DNA拷贝数（104 ≥1~6 ） 与临床相关性好，可以区分“死菌”“活菌”：病原体死亡，RNA很快降解（=“培养”） 减少无效治疗，比如抗生素滥用 可以诊断“活动性感染” 活动性感染：指示RNA转录活跃 潜伏感染：指示RNA不转录 不易污染：靶标和扩增产物都是RNA RNA 用于TB的检测多国诊疗指南 2009：美国CDC更新NAAT法在TB实验室诊断中应用的指南 ——所有疑似TB的初诊病人，除了做涂片之外，都必须用TB-SAT检测至少一份样本。 （RNA获得FDA 认证可检测涂阴、涂阳标本，DNA只获得FDA 认证可检测涂阳标本） Updated Guidelines for the Use of Nucleic Acid Ampflication Test in the Diagnosis of Tuberculosis (2009) United States 目前，我实验室前期预实验275例，灵敏度达到93%，特异性达到85%.该方法只适合痰标本 2.5结核抗体lgG、lgM 2.6 Gene Xpert 缺点： 1、价格昂贵、一个test成本在50欧元 2、仅能检测利福平一个药物。 标本留取 结核培养：任何标本，不同标本培养阳性率不同 结核DNA(HAIN)：痰、灌洗液、穿刺液等 结核RNA：痰、灌洗液、穿刺液 干扰素：肝素钠全血4ml XPERT：痰、灌洗液、穿刺液等 近期新增项目：肺炎支原体RNA、手足口病RNA、性病三项RNA. 对血液标本建议γ干扰素检测 研究生：赵飞骏 导 师：吴移谋 专 业：病原生物学 病原生物学研究所2002级硕士研究生论文答辩 梅毒螺旋体外膜蛋白核酸疫