ZNT7在神经系统内表达以及锌缺乏影响海马学习记忆功能机制.pdfVIP

·中文论著摘要· ZNT7在神经系统内的表达以及锌缺乏影响海马学习 记忆功能的机制 ·_■JL-·。●一 刖 吾 锌是机体必需的微量元素，广泛存在与神经系统中参与许多生物学功能。中 枢神经系统中大约85％的锌离子与蛋白质等大分子结合或作为许多酶的辅酶，少 neurons，ZENl的突触小泡内。 部分游离锌离子存在于锌能神经元(zinc．enriched 锌离子不能自由通过细胞膜，特定的转运体和膜通道参与锌离子的跨膜转运 和代谢。锌转运体(zinctransporter，ZNT)是参与脑锌代谢的重要蛋白家族之一， 目前已知该家族拥有8个成员，即ZNTl．8。ZNT为一组结构和功能相近的蛋白 质，均具有六个跨膜区域并且有一个区域含有丰富的组氨酸，为锌离子的结合位 点，ZNT的主要功能是将锌离子转运出细胞或聚集在细胞器内，其中ZNT7是一 个分子量为42kDa的膜蛋白，定位于高尔基复合体内，参与锌离子在高尔基复合 体内的聚集和含锌蛋白质的加工和组装，是维持神经系统锌稳态的重要ZNT之一。 研究表明ZNT7存在于神经系统的大脑和脊髓等，本研究则进一步对ZNT7在小 脑和交感神经节的分布和表达进行了详细地研究。 海马是产生长时程记忆和短时程记忆的关键脑区，是记忆编码、整理和检索 的枢纽。在海马齿状回和CA3区大量的游离锌离子存在于苔藓纤维的突触小泡内。 在突触兴奋过程中，锌离子释放到突触间隙内，作为神经调质调节突触后膜受体 的功能；同时锌离子还能进入突触后神经元，参与海马学习记忆通路的调节。研 究表明锌缺乏能够减少海马锌离子聚集，并引起学习记忆功能的损伤，但到目前 为止锌缺乏影响海马学习记忆的具体机制还不十分清楚。海马神经元死亡和再生 与突触可塑性的形成密切相关，成年哺乳动物海马齿状回是神经干细胞的重要区 域之一，齿状回颗粒细胞下层的神经干细胞能够分化为神经元，新生的神经元移 行入颗粒细胞层并发出苔藓纤维参与海马的突触环路的形成，但锌缺乏是否通过 影响神经干细胞分化以及促进神经元凋亡导致学习记忆功能损伤还不十分清楚。 此外，海马长时程增强(10ng．term 令人感兴趣的是，目前已经证实在苔藓纤维．CA3的突触通路中，锌能神经元轴突 终末释放的内源性锌离子是诱导LTP形成的重要因素，锌缺乏是否通过影响 CaM．CaMKII—CREB通路蛋白的表达进而影响学习记忆功能尚未见报道。 本研究应用形态学和分子生物学技术，对锌离子和ZNT7在CD．1小鼠神经系统 内的定位分布和表达、锌缺乏对海马神经干细胞的增殖分化以及 CaM．CaMKII．CREB通路蛋白的影响进行系统分析，为深入探讨锌缺乏导致脑锌代 谢紊乱及其影响海马神经元学习记忆功能的机制奠定基础。 实验方法 Research Diets)，建立锌缺乏动物模型，同周龄小鼠饲以适锌饲料作为对照组。 应用金属自显影AMG技术检测CD．1小鼠神经系统内游离锌离子的分布；应用 免疫组织化学、免疫荧光双标和激光共聚焦扫描显微技术检测ZNT7在CD．1小鼠神 经系统内的定位分布及其与锌离子的关系；应用AMG和TSQ荧光染色技术检测锌 缺乏CD．1小鼠海马游离锌离子的表达变化；应用免疫组织化学、免疫荧光双标和 激光共聚焦扫描显微技术分析锌缺乏小鼠海马神经干细胞的增殖和分化；应用 Western blot技术及TUNEL染色对锌缺乏影响神经细胞死亡的机制进行分析；应用 Westernblot技术分析锌缺乏CD．1小鼠海马学习记忆通路蛋白的表达变化。 实验结果 blot分析 1、CD．1小鼠神经系统内ZNT7表达的Western 应用Westernblot技术对CD．1小鼠神经系统内ZNT7在蛋白水平的表达进行 检测。结果显示，小鼠的大脑皮层、海马和小脑中ZNT7蛋白表达量较高，在脑 干、脊髓和颈上神经节中ZNT7表达量较少。 2、ZNT7在CD．1小鼠小脑和颈上神经节内的定位分布 2