鸡骨草中生物碱提取及测定.docVIP

鸡骨草中生物碱提取及测定 　　[摘要] 目的 优化鸡骨草中生物碱的提取工艺，建立相思子碱、下箴刺桐碱的超高效液相色谱（UHPLC）测定方法。 方法 以相思子碱、下箴刺桐碱的提取量为指标，采用正交试验设计考察乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数对提取工艺的影响；色谱条件：Shim-pack XR-ODS Ⅱ色谱柱（2.0 mm×75 mm，2.2 μm）；流动相：甲醇-乙腈-水-乙酸-三乙胺（6∶2∶92∶0.2∶0.3）；检测波长280 nm；流速0.4 mL/min；进样量2 μL；柱温30℃。结果 最佳提取条件为加10倍量45%乙醇，提取时间40 min，超声提取2次；相思子碱和下箴刺桐碱分别在1.49～148.80 μg/mL（r=0.9998），0.84～84.20 μg/mL（r=0.9998）范围内有良好的线性关系，加样回收率为98.9%、98.2%，RSD均 　　1 仪器与材料 鸡骨草药材分别购于广西贵港、柳州、桂林、玉林、贺州、梧州等地，由右江民族医学院药学院黄锁义教授鉴定为豆科植物广州相思子，将根、茎、叶分开，干燥后粉碎，过40目筛，保存备用 LC-30A超高效液相色谱仪（岛津），KQ-250DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），FA2004N型电子分析天平（上海民析精密科学仪器公司），101-3型电热鼓风干燥箱（上海齐欣科学仪器公司），FWl77型中草药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司），XH-100A微波催化萃取仪（北京祥鹄科技发展有限公司） 相思子碱对照品（百灵威，批号：LI50P81）、下箴刺桐碱对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号：P26 N6F6550）；乙腈、甲醇为色谱纯，乙醇、磷酸、三乙胺为分析纯，水为超纯水 2 方法与结果 2.1 方法学考察 2.1.1 色谱条件 Shim-pack XR-ODS Ⅱ色谱柱（2.0 mm×75 mm，2.2 μm）；流动相：甲醇-乙腈-水-乙酸-三乙胺（6∶2∶92∶0.2∶0.3）；检测波长280 nm；流速0.4 mL/min；进样量2 μL；柱温30℃。对照品和供试品溶液的色谱图，见图1 2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取对照品相思子碱7.44 mg、下箴刺桐碱4.21 mg分别置于10 mL的容量瓶中，用甲醇溶解、定容，配制成0.744、0.421 mg/mL的储备液 2.1.3 供试品溶液的制备 取贵港鸡骨草茎的粉末，精密称取1.00 g，加10 mL 45%乙醇超声提取40 min，提取功率250 W，重复提取2次，合并提取液，用45%乙醇定容，过0.22 μm微孔滤膜，作为供试品溶液，待测 2.1.4 线性关系考察 分别吸取0.02、0.05、0.2、0.6、1.0、2.0 mL已配好的2种对照品储备液，置10 mL量瓶中，用甲醇定容，得系列不同质量浓度的混合对照品溶液，按“2.1.1”项下条件测定，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，得回归方程分别为Y=4127.4X-5368.9（r=0.9998），Y=4003.5X-4999.5（r=0.9997），线性范围依次为1.49～148.80，0.84～84.20 μg/mL 2.1.5 精密度试验 取同一对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，相思子碱和下箴刺桐碱峰面积的RSD为0.88%、0.95% 2.1.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12、24 h进样测定，结果相思子碱、下箴刺桐碱的峰面积的RSD为1.26%、1.31%，表明样品溶液在24 h内稳定 2.1.7 重复性试验 精密称取6份鸡骨草，按“2.1.3”项下供试品溶液的制备方法制备，按“2.1.1”项下色谱条件测定，计算峰面积的RSD。结果相思子碱和下箴刺桐碱的RSD为1.69%、1.89%，表明该方法重现性良好 2.1.8 回收率试验 精密称取6份已知相思子碱、下箴刺桐碱含量的样品，每份1.00 g，分?e加入一定量相思子碱、下箴刺桐碱对照品溶液，按“2.1.3”项下供试品溶液的制备方法制备，按“2.1.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率。结果相思子碱平均回收率为98.9%、RSD为1.76%，下箴刺桐碱平均回收率为98.2%、RSD为1.94%，表明该方法回收率较好 2.1.9 进样量考察 取同一对照品溶液，分别按1.0、2.0、4.0、8.0 μL体积进样，观察相思子碱、下箴刺桐碱的色谱峰型，结果当进样体积超过2.0 μL时，峰型展宽较为严重，最终选择进样量为2.0 μL 2.2 正交试验 在单因素试验基础上，以相思子碱、下箴刺桐碱的提取量为评价指标，选取乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数为考察