第10章 酶作用机制.ppt

第十章 酶的作用机制和酶的调节;主要内容;9.1、酶的活性部位;（二）酶活性部位的特点;川靖贺贪婚猫檀娘玉蔫盒议火至柳制娄挠微姆逾慎别沽拧淹构论关秩赡土第10章 酶作用机制第10章 酶作用机制;4.酶的活性部位位于酶分子表面的一个裂隙（crevice）内.裂隙内是一个相当疏水的环境，从而有利于同底物的结合。 5.底物靠次级键较弱的力与酶结合。 6.酶的活性部位具有柔性和可运动性 ;（三）研究酶活性部位的主要方法;DFP的作用;9.2、影响酶催化效率的有关因素;咪唑催化对-硝基苯酚乙酸酯的水解反应;实验结果表明，分子内咪唑基参与的水解反应速度比相应的分子间反应速度大 24 倍。说明咪唑基与酯基的相对位置对水解反应速度具有很大的影响。 ;轨道定向(orbital-steering)假说示意图;（二）底物的形变（distortion）;诱导契合模型与底物的形变;（三）酸碱催化（acid-base catalysis）;广义酸基团 广义碱基团（质子供体） （质子受体） ;影响酸碱催化反应的因素包括酸碱强度及质子传递的速率。 His咪唑基的解离常数约6.0，咪唑基解离下来的质子浓度与水中的[H+]相近，在中性条件下，一半以酸形式存在，一半以碱形式存在;同时，咪唑基接受质子和供出质子的速率十分迅速，半衰期小于10-10秒。 所以，His是酶中最有效最活泼的一个催化功能基团。;（四）共价催化 （covalent catalysis）;(五) 金属离子的催化作用;9.3、酶催化反应机制的实例;溶菌酶是一种葡糖苷酶，能催化水解NAM的C1和NAG的C4之间的糖苷键，但不能水解NAG C1和NAM C4之间的β（1-4）糖苷键。;X射线晶体分析法揭示了溶菌酶的三维结构;(NAG)3是研究溶菌酶活性部位的良好竞争性抑制剂;Back;第4个糖残基D环因空间原因必须由正常的椅式变形为能量较高的半椅式构象。因此糖苷键的稳定性降低，键容易从此断裂。;H218O溶液中酶促水解底物(NAG)6的实验证明酶切位点在D糖基的C1和E残基的糖苷键的O之间。;Glu35的-COOH提供一个H+到D与E之间的糖苷键O原子上。糖苷键断开，形成正碳离子过渡态中间产物。Asp52对中间产物有稳定作用。EF离开酶分子。 正碳离子中间体与溶剂中的OH-反应， ABCD离开。同时Glu35质子化。;（二）丝氨酸蛋白酶 丝氨酸蛋白酶家族的所有成员在其活性部位都含有Ser残基，并且催化机制也相似。 具有消化作用的丝氨酸蛋白酶是胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。 胰凝乳蛋白酶机制的动力学特征分酰化和脱酰化两步。 Ser195的异常反应性与催化三联体有关。 丝氨酸蛋白酶的催化机制提供了一种典型的酸碱催化和共价催化的例子。;丝氨酸蛋白酶;三种消化酶在胰腺中合成，以非活性的酶原形式分泌到消化道中，在消化道中通过胰蛋白酶水解除去部分肽链，转变成活性酶形式。;3个极性残基：His57、Asp102和Ser195在活性部位形成催化三联体。;胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶的底物结合口袋决定了各自的专一性。;胰凝乳蛋白酶机制可以通过人工合成底物——简单的有机酯进行研究。;胰凝乳蛋白酶同乙酸－p－硝基苯酯反应的动力学曲线;胰凝乳蛋白酶的机制分两个阶段： 第一步是乙酰复合体的形成，称为酰化作用。 第二步是乙酰复合体通过水解再生为游离的酶，称为脱酰作用。;胰凝乳蛋白酶中的催化三联体。;丝氨酸蛋白酶的催化机制;胰蛋白酶的催化机制;9.4、酶活性的调控机制;（一）酶结构的调节 通过对现有酶分子结构的影响来改变酶的催化活性。这是一种快速调节方式。 别构调控 酶原激活 共价调控 ;别构调控;当别构酶的一个亚基与其配体（底物或别构剂）结合后，能够通过改变相邻亚基的构象而使其对配体的亲和力发生改变，这种效应就称为别构酶的协同效应。 别构剂一般以反馈方式对代谢途径的起始关键酶进行调节，常见的为负反馈调节。 ;别构酶的基本性质;多亚基;别构酶的动力学;饱和比值（Rs）可用来鉴别不同的协同作用以及协同的程度。 典型的米氏类型的酶Rs=81 具有正协同效应的别构酶Rs81， Rs 正协同效应 具有负协同效应的别构酶Rs81， Rs 负协同效应;意义：;K型效应物和V型效应物;别构模型;序变模型（KNF） 酶分子中的亚基结合小分子物质（底物或调节物）后，亚基构象逐个地依次变化，因此亚基有各种可能的构象状态。 ;酶原的激活;缀找么泌舱捣裁卓怨瞄柬痪啸贰跺椅蚤峙脉硬篇儡瘟佛淑挪妹氨鬃褪蓖晾第10章 酶作用机制第10章 酶作用机制;Back;共价调控;共价修饰的主要方式是磷酸化和脱磷酸化。;虑嘱篡涩裙财要街维辆喷序缄廖葫速乘姨麦寥海乘撩向