慢性应激对大鼠海马中即刻早期基因cfos表达的影响.pdfVIP

3009。由中国医科大学实验动物中心提供。 2主要试剂兔抗大鼠c—F05多克隆抗体，生物素标记的山 羊抗兔IgG，SABC免疫组化试剂盒，均购于Boster公司。 Morpl∥ 3主要仪器YSD一4G型药理生理实验多用仪；Meta Cool Snapfx／Ax70计算机图像分析系统。 二、实验方法 l动物分组 实验大鼠适应环境饲养I周以后，称重，并采用Open—field 法(开场实验)测定行为，之后将大鼠随机分为急性应激对照组， 重复应激组和慢性综合应激抑郁症模型组，每组各15只大鼠。 2应激过程 急性应激对照组记为A组，分2笼喂养；第1～2l天不给予任 何刺激；第22天强迫冰水游泳应激5rain。第6天和第21天末均 进行Open—field法评分并称重。 重复应激组记为R组，单笼喂养；第1～7天每天强迫冰水游 泳应激5rain。第6天末行Open—field法评分并称重。 慢性综合应激抑郁症模型组记为C组，单笼喂养；第1～21天 每天接受各种不同的应激：电击足底，冰水游泳，摇晃，夹尾，热应 激，禁食，禁水；第22天强迫冰水游泳应激5rain。第21天末行 Open～field法评分并称重。 3灌流取材与切片 每组实验大鼠于最后一次游泳应激开始后的第0，30，60，120 和240min，各随机选取3只，用戊巴比妥钠行腹腔麻醉后，经左心 室快速灌注37℃生理盐水200ral，继之持续灌注4℃的4％多聚甲 醛溶液300ml；然后剥离脑，后固定48小时以上；梯度乙醇脱水 后，石蜡包埋，行冠状切片。 4免疫组化ABC法检测切片中的FOS蛋白。 5图像分析 ·2· 每只大鼠选取海马较完好的切片4张，在计算机图像分析系 统上分别测量双侧海马CA3区和齿状回(DG)内FOS阳性细胞的 相对切面面积比和平均目标灰度值。 6统计学处理 采用SPSSl 1．0统计学软件对数据进行分析。 实验结果 一、光镜下的海马神经元 光镜下观察，A组大鼠海马CA3区锥体细胞和DG颗粒细胞 排列都较整齐、密集；R组与A组相似；C组大鼠DG颗粒细胞与 A组相比没有明显改变，但CA3区锥体细胞排列稀疏，细胞有的 呈长圆形或梭形，数量有所减少，细胞间隙增大。 二、体重和开场行为评定 应激后的R组和C组大鼠的体重，与A组相比，无明显差异； 中央格停留时间延长，水平穿越格数减少，竖立次数减少，修饰次 数减少，粪便粒数增多(P0．01～0．05)。 三、游泳应激后大鼠海马中FOS蛋白的表达 (一)各组大鼠FOS表达的时程 1 2R组①在海马CA3区，与0min相比，60min时的面积比增 ·3． 0．01一O．05)。 3c组①在海马CA3区，与0min相比，60min时的面积比增加 均无显著差异，无明显表达峰值。②在DG，与0min相比，60rain 时的面积比增加(均为P0．05)，峰值出现在60rain；各检测时点 的灰度值与0min相比均无显著差异，无明显表达峰值。 (二)各组大鼠FOS表达的比较 iA组与R组①R组大鼠CA3区数据与A组相比，面积比在 组大鼠DG数据处与A组相比，面积比在60和120min时降低(P 0．01)；灰度值无显著差异。 2A组与C组①C组大鼠CA3区数据与A组相比，面积比在 灰度值在0，60，120和240min均增加(P0．01—0．05)。 3R组与c组①c组大鼠CA3区数据与R组相比，面积比在 比，面积比元显著差异；灰度值在60和240min明显增加(均为P O．05)。 讨 论 到目前为止，动物抑郁模型一般分为应激模型、孤养模型、药 理学模型和脑损伤模型等。本研究综合了应激和分养两种经典模 型，利用长期不可预见的中等强度应激，造成分养动物的抑郁状