第二节--分离特定的微生物并测量数量.ppt

* 常用分离纯化微生物形成单个菌落的基本方法有哪些？ 平板划线法和稀释涂布平板法等 10倍系列稀释 多种混杂 平板 培养 单菌落 单菌落转接培养 纯种（纯培养） 请阅读17页,思考： 1.微生物分离的原理？ 2.微生物分离的方法？ 原理：根据微生物对营养、氧气、pH等要求的不同，通过只提供目的的微生物的必需条件，从而达到选择分离微生物的目的。 平板分离法 平板划线法 涂布平板法 混合平板法 一、涂布平板法与混合平板法 使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！ 操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！ 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。 二、菌落 一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养物； 单个微生物只在固体培养基上形成菌落； 在液体培养基中不会形成菌落。 选择培养基： 只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基。 三、选择培养基 请阅读18页，找一找： 常用的选择培养基有哪些？ 常见的选择培养基 高温菌 抗生素 加入 加入 酵母菌、霉菌等真菌 高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 只有尿素作为惟一氮源 分解尿素的细菌 不加氮源的无氮培养基 固氮菌 高温 10%酚 放线菌 加入 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶。 CO(NH2)2 脲酶 + CO2 NH3 +H2O 四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 5.实验原理 研究思路 样品稀释 土壤取样 培养和观察 CO(NH2)2 脲酶 + CO2 NH3 +H2O 选择培养基 涂布平板 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 H2O 1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 1 000 mL 分离可分解尿素的微生物培养基 如果要计数这些微生物，怎么数数呢？ （1）间接计数法（活菌计数法） 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C—某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V—涂布平板时所用的稀释液的体积(ml) M—稀释倍数 常用稀释涂布平板计数法。一般选择菌落数在30-300的平板进行数，每个稀释倍数涂布3个平板进行计数，取平均值。 6.统计细菌数目 （2）显微镜直接计数 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点 利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。缺点：不能区分死菌与活菌。 计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。 如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。 计算公式 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 25×16计数板： 总菌数/ml=每小方格内平均菌数×4×106×稀释倍数 （酵母细胞数/ml=（80小格内酵母细胞个数/80）×400×10四次方×稀释倍数 ） 7. 分解尿素的细菌的鉴定 鉴定的原理： 细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基的pH升高。 鉴定方法： 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，接种细菌培养，指示剂变红，则该菌能分解尿素。 一、基础知识 1.纤维素 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。 土壤中某些微生物能够产生纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖，后再利用。 *