组织化学及免疫组织化学.doc

PAGE PAGE 20 临床病理学特殊技术 第1节 组织与细胞化学 （histochemistry and cytochemistry） 【概念】 运用物理和化学的技术方法显示组织细胞结构中的各种化学成分，并对这些化学物质进行定性、定位、定量，从而分析研究生物在生理或病理状态下细胞组织的代谢、机能及形态变化规律。 细胞化学是研究细胞的化学成分及其在细胞活动中的变化和定位的学科。对细胞中的不同组分进行区别着色是细胞化学中最基础的工作。 组织化学是指利用细胞或组织中的某些化学成分生成有色沉淀物，对细胞组织中的这些化学成分进行定性、定位和定量分析的特殊技术方法。 细胞化学和组织化学的发展是分不开的，都是建立在细胞学、组织学以及生物化学的基础上。 【基本原理】 用于组织与细胞化学研究的染料可以是碱性的也可以是酸性的。酸性染料的生色基团是硝基和醌基；碱性染料的生色基团，包括着偶氮基吲胺基。染色的原理是基于在酸性染料中具有染色作用的阴离子和细胞内的碱性物质相结合，而碱性染料中的阳离子和细胞内的酸性物质相结合，所以酸性的细胞成分被碱性染料所染色，而碱性的细胞组分则被酸性染料染色。 组织与细胞中的化学成分和其相应的底物呈一系列的化学反应，形成于显微镜下可见到的反应产物呈色。 常见的细胞化学物质成分染色方法见表2-1，组织化学物质成分染色方法见表2-2。 表2-1 细胞化学物质成分的鉴定 显示物质 染色方法 染色结果 用途 DNA和/或RNA 孚尔根反应法 DNA呈紫红色 显示DNA及染色体倍体数分析 甲绿-派郎宁法 DNA呈绿色，RNA呈红色 显示DNA与RNA 吖啶橙荧光染色法 红色荧光为DNA，绿色荧光为RNA或单链DNA 用于鉴别肿瘤细胞与凋亡细胞 糖元 过碘酸雪夫反应（PAS） 糖元和其它多糖物质呈红色，细胞核呈蓝色 鉴别细胞内空泡的性质（糖原贮积病、糖尿病、骨髓瘤浆细胞胞浆内的Russell小体与核内的Dutcher小体；某些透明细胞肿瘤（横纹肌、平滑肌、软骨肉瘤、肝癌、汗腺瘤、化感器瘤） 黏多糖（黏液物质）* 高铁双胺（HID）染色 显示硫酸化黏液物质。 显示黏液物质与性质。中性黏液常见于胃粘膜、十二指肠腺、颌下和前列腺上皮；酸性黏液常见于皮肤、动脉、软骨、角膜、肥大细胞、结肠与气管的杯状细胞。胃Ⅱb型不完全化生的柱状细胞分泌硫酸黏液 AB/PAS染色法 酸性黏液呈蓝色、中性黏液呈红色、混合黏液呈紫色 脂类（用新鲜组织，冰冻切片） 苏丹Ⅲ染色 脂肪呈桔红色 显示脂滴和所有含脂细胞，用于鉴定脂肪变性、脂肪栓子、泡沫细胞以及肿瘤的诊断与鉴别诊断 苏丹Ⅳ染色 脂肪呈鲜红色 油红O染色 中性脂肪呈深橙红色 锇酸染色 脂肪呈黑色 神经细胞尼氏小体 甲苯胺蓝法 细胞核淡蓝色，尼氏小体深蓝色，背景无色 显示神经元尼氏小体的改变提示神经元变性与损伤 酶类（用新鲜组织，冰冻切片） 碱性磷酸酶 （钙钴法、α-萘酯磷酸法） 该酶分布广泛，多见于有活跃转运功能的细胞膜内。 钙钴法：碱性磷酸酶活性处呈黑色或棕黑色 成熟中性粒细胞呈阳性反应。 酶活性增高可见于：严重化脓性感染、急性淋巴细胞白血病、再生障碍性贫血、类白血病反应、多发性骨髓瘤、尤文肉瘤、恶性淋巴瘤、成骨肉瘤、滑膜肉瘤等。 酶活性减低可见于：病毒感染、急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、粒细胞缺乏症、恶性组织细胞增生症、传染性单核细胞增多症、恶性贫血及阵发性睡眠性血红蛋白尿症等 α－萘酯磷酸法：酶活性处呈暗蓝色 酸性磷酸酶 （硝酸铅法、Leder-Stutt改良偶氮法） 多用于组织印片 分布广泛，主要位于溶酶体内。以前列腺、吞噬细胞最丰富；亦存在于肝、肾、肾上腺及肠管上皮刷状缘。在单核细胞、组织细胞及中性粒细胞的胞浆中弥漫分布，而在T细胞及其前体中呈局限性点状阳性反应 前列腺癌、霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、表皮样癌强阳性。 有助于急性单核细胞白血病、组织细胞性淋巴瘤和恶性组织细胞病的诊断；毛细胞 HYPERLINK /JBZT/NK-1/XUY-1/BXB-1/index.htm \t _blank 白血病呈阳性反应，且不被酒石酸盐所破坏；高雪病细胞酸性磷酸酶染色（ACP）染色为阳性，尼曼一匹克病细胞ACP染色为阴性 琥珀酸脱氢酶（硝基蓝四唑法） 定位于线粒体内膜，心肌、肾小管、肝细胞含量最丰富。 利用琥珀酸脱氢酶使琥珀酸钠脱去H+而使硝基四氮唑蓝还原为蓝色的二硝基甲替沉淀于酶活性之处 检查线粒体功能标志酶。 淋巴细胞、单核细胞、巨核细胞、血小板、该酶染色活性高。淋巴细胞白血病酶活性显著减低，而淋巴瘤时酶活性显著升高 NADH脱氢酶 位于线粒体内膜及胞浆中 检查线粒体功能，中心核病 乙酰胆碱酯（Karnovsky-Roots