人脐带间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的评价.pdfVIP

中文摘要 分子，免疫源性较弱。本研究旨在体外研究的基础上，观察 hUCMSCs移植到大鼠脊髓损伤模型后存活、分化情况以及 对神经功能恢复的影响，为细胞移植寻找一种新型的具有良 好应用前景的细胞来源提供理论依据，进而为其在脊髓损伤 治疗中应用奠定基础。 方法：hUCMSC来源于剖腹产的正常胎儿脐带，用组织 块培养法，经传代进行扩增，弃去未贴壁细胞，细胞传3-6 代，hUCMSCs流式细胞学检测细胞表面抗原，首先证实其为 脐带间充质干细胞以备移植之用，移植时调至细胞终浓度l ×105／ul。取SD大鼠70只，随机分为3组：①脊髓半切 +hUCMSC组(n=30)，②脊髓半切+PBS组(n=30)幂n③假 手术组(n--10)。脊髓!I刍切模型经大鼠胸背后正中切121，咬除 T8、9棘突和椎板，手术显微镜下用虹膜剪将T9左fN_-,t三脊髓 剪断。脊髓半切+hUCMSC组和PBS组又分为头侧注射、 尾侧注射和头尾两侧注射三个贬组。微量注射器固定于立体 0min内缓慢注 定向架，hUCMSCs组将hUCMSCs悬液在1 入到脊髓半切头侧(头侧注射组)或尾侧(尾侧注射组)损伤临 近区域的灰白质交界处(距脊髓表面约0．7mm)，每点691，总 细胞数6×105细胞；头尾两侧注射组于半切头尾两侧损伤临 05细胞， 近区各取一点注射，每点391，总细胞数亦为6×l 留针5min，拔针后针孔用医用生物蛋白胶封闭以防细胞外 漏。移植后1、7、14、21、28天观察大鼠神经功能恢复情 况，采用改良Tarlov评分对动物进行行为学检查，测量抓 握、维持姿势能力。于移植后28天用4％多聚甲醛灌注处死 大鼠，取出脊髓损伤组织行连续冰冻横切片，厚5lain；首先 应用MABl281免疫组化染色检测移植到脊髓的hUCMSC是 中文摘要 否存活，然后行免疫组化双标染色检测存活的hUCMSC胶 达情况。 结果：hUCMSCs流式细胞学检测细胞表面抗原发现，造 血前体细胞标志抗原CD34、白细胞标志抗原CD45、淋巴细 胞表面抗原CDl la、单核细胞／巨噬细胞表面抗原CDl4等 性，提示MSC具有异体移植可行性；MSC的标志抗原CD29、 CD44、CDl05均为阳性，证实该细胞为脐带间充质干细胞。 大鼠脊髓半切损害后，hUCMSC组动物较PBS组有明显的 特异性是与人细胞核结合，经DAB显色后细胞核呈棕褐色。 本实验结果显示hUCMSCs移植后28天受试动物脊髓内可见 MABl281阳性细胞，说明其植入受试动物的脊髓内可以存 anti—humannucleimonoclonal antibody)染色阳性的基础上， 进一步免疫组化双标染色显示MABl28l阳性细胞亦分别有 GFAP阳性细胞可见明显的树突生长，可检测到NSE或 ％。 结论：人脐带MSCs来源丰富，易于分离、培养和扩增， 植入的脐带间充质二F细胞不但可在受损的脊髓中存活、向损 伤部位迁移，并向神经元样、神经胶质样细胞分化，且可促 进大鼠脊髓损伤后神经功能恢复。hUCMSC为脊髓损伤神经 再生、修复提供了司彳亍性。加之脐带间充质干细胞来源广泛， 中文摘要 扩增快速，不涉及伦理道德等问题，无疑为细胞移植治疗脊 髓损伤提供了独具优势的细胞来源。hUCMSC作为一种来源 广泛的干细胞用于治疗脊髓损伤可能具有重要的价值。 关键词：脊髓：愤伤；脐带间充质干细胞；移植：大鼠 英文摘要 一。—————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————一 Evaluationof function recovery neurological humanumb