白藓组织培养及无性系建立的研究论文.docVIP

　　白藓组织培养及无性系建立的研究论文 韩莹，王悦，丁莲，李永德，姜长阳 【摘要】 目的对白藓资源进行种质保存，满足人们栽培对种苗的需求。方法以白藓嫩茎为材料，以植物组织培养方法为手段，进行了愈伤组织诱导.freelg·L-1+NAA1.0～1.5 mg·L-1为嫩茎愈伤组织的诱导培养和继代培养的理想培养基；MS+AgNO31.5mg·L-1+BA0.8mg·L-1+naa0.2mg·L-1是嫩茎愈伤组织和不定芽分化培养的理想培养基；1/3MS+IAA0.4～0.6mg·L-1是生根培养和试管苗生根继代培养的理想培养基；移栽的试管苗保持了野生白藓的所有生物学性状，成功地建立起白藓的无性系。结论嫩芽诱导的愈伤组织建立的无性系能对其进行种质保存，所繁殖的种苗能满足人们栽培的需求。 【关键词】 白藓； 愈伤组织； 无性系； 快速繁殖 白藓Dictamnus dasycarpus，又称八股牛，属于芸香科白藓属多年生草本植物，生长于山坡、林下、林缘和草地。在我国的东北、华北、西北和华东等地有分布，朝鲜、蒙古和俄罗斯也有分布［1～3］。白鲜叶可提取芳香油；根茎作农药用，可防治多种病虫害；根皮（白藓皮）入药，具有解毒、祛热、利尿、除湿和杀虫等功效，能治皮肤瘙痒、湿疹、黄水疮、黄疸、肝炎和阴部瘙痒等疾病［3～5］。由于白藓既可作无公害的农药，又是治疗多种疾病的中药，从而出现了人们大量采收，数量越来越少的现象。于是，辽宁南部地区有人试图对其进行栽培，但由于人们长期地过量采挖，已经难以收集到种子，只能将有限的野生植株挖回来作为种苗，这又使数量非常少的野生白藓资源遭到了破坏。于是，我们对白藓进行了组织培养及无性系建立的研究，以期满足人们栽培对种苗的需求。虽然已多有芸香科植物组织培养研究的报道［6～9］，但迄今未见白藓组织培养及无性系建立的研究的报道。本研究以白藓的嫩茎为材料，成功地诱导形成愈伤组织，建立起无性系。 1 材料 1.1 材料及灭菌五月上旬至中旬，将林缘草地上长势非常旺盛的白藓嫩茎切下后，放到500 ml的磨口广口瓶中，用自来水振荡洗涤30 min左右，再用0.05 %安利洗涤液振荡洗涤20 min左右，然后移到超净工作台上，用70%～75%的乙醇灭菌约15 s后，迅速用无菌水振荡洗涤2次，倒入0.05 % HgCl2 溶液振荡灭菌3 min，接着用0.025 % HgCl2 溶液振荡灭菌8 min，再用无菌水振荡洗涤6次漓干后，将装有材料的瓶子置于27℃的温箱中放置24 h，然后再用0.025%HgCl2灭菌6 min，接着用无菌水洗涤6次。即可获得白藓无菌嫩茎。 1.2 培养条件以MS，1/2MS，1/3MS为基本培养基，附加不同种类不同浓度的BA，IBA，IAA，NAA和2,4-D。以MS为基本培养基加蔗糖30 g·L-1，以1/2MS为基本培养基加蔗糖15 g·L-1，以1/3MS为基本培养基加蔗糖10g·L-1。培养基胨力强度为180 g/cm2［10］，pH为5.8～6.0，培养温度20～25℃，光照度3 000 Lx左右，光照10～12 h·d-1。 2 方法 2.1 不同培养基对愈伤组织的诱导的影响 将无菌嫩茎用解剖刀切成长约0.2 cm的无生长点茎段，接种到附加不同浓度BA、IBA、NAA的1/2MS培养基上，进行愈伤组织的诱导培养。培养到50d时观察统计培养结果。嫩茎愈伤组织的诱导试验重复了3次，每次试验继代培养5代。 2.2 不同激素愈伤组织分化的影响 将继代培养45 d生长一致的愈伤组织颗粒分散成独立的颗粒后，接种到以MS+ AgNO31.5 mg·L-1为基本培养基，附加不同浓度BA、2,4-D或NAA的培养基中，进行愈伤组织的分化培养。每种培养基接种100个愈伤组织颗粒，统计观察分化率和分化不定芽的生长状况。 2.3 不同浓度IAA对不定芽生根的影响 把上述继代培养的丛生状、生长旺盛、高0.5 cm以上的不定芽从基部剪下，接种到以1/3MS为基本培养基，附加浓度分别为0.2，0.4，0.6 ，0.8，1.0 ，1.2 mg·L-1和1.4 mg·L-1的IAA培养基上，进行不定芽的生根培养。生根实验重复了3次，每次试验接种200个不定芽。 2.4 试管苗的移栽、扦插把继代培养的生根试管苗培养瓶移到日光温室中，除掉培养瓶瓶塞，在4000～7000Lx光照下炼苗4 d，用镊子将试管苗取出，在清水中洗去根部培养基后，移栽到上面分别铺着一层厚为6～7 cm的河沙、珍珠岩、山皮土、园土、炉灰渣（小颗粒状）5种移栽基质、下面为肥沃园土的温室苗床上。移栽后前15 d保持相对湿度为95％左右、温度20～28℃、没有直射光的条件。 把经过上述炼苗4 d的试管苗取出后，剪成长2cm左右，至少具有