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慢病毒包装手册
200年月
目 录
慢病毒系统简介…………………………………………………………………………………3
实验流程描述……………………………………………………………………………………5
实验材料…………………………………………………………………………………………6
病毒包装细胞 293T 的培养…………………………………………………………………7
Lentivirus 病毒包装……………………………………………………………………………8
病毒的收获及浓缩……………………………………………………………………………9
Lentivirus 滴度测定…………………………………………………………………………11
1) 孔稀释法测定滴度…………………………………………………………………………11
2) Real time 定量 PCR 法测定滴度…………………………………………………………14
示例: Real-time 定量 PCR 法测定 GFP-tagged 慢病毒……………………………………17
参考文献………………………………………………………………………………………20
地址：北京市海淀区温泉路45号 电话：
邮编： 传真：
网址：http:// Email ：
2
慢病毒系统简介
慢病毒（Lentivirus ）载体是以人类免疫缺陷型病毒（HIV ）为基础发展起来的基因治疗
载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，并可以在体内较长期的表达且安全性高。
英茂盛业提供的 Lentivirus 为“ 自杀”性病毒，即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞，
也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。Lentivirus 中的毒性基因已经被剔除并被外源性目
的基因所取代，属于假型病毒。但该病毒仍然具有可能的潜在的生物学危险，英茂盛业建议
不要使用编码已知或可能会致癌的基因的假型病毒，除非已经完全公认某个基因肯定没有致
癌性，否则均不建议采用假型病毒进行生物学实验。
英茂盛业慢病毒载体系统由 pLV穿梭载体、pHelper 1.0 载体和 pHelper 2.0 载体三质粒
组成。pGC-LV 载体中含有 HIV 的基本元件 5’LTR 和 3’LTR 以及其他辅助元件，例如WRE
(woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element) 。通常根据不同的实验目的针
对 pGC-LV 载体改造以进行启动子活性研究、基因表达研究、RNA 干扰等研究。pHelper 1.0
载体中含有 HIV 病毒的 gag 基因，编码病毒主要的结构蛋白；pol 基因，编码病毒特异性的
酶；rev 基因，编码调节 gag 和 pol 基因表达的调节因子。pHelper 2.0 载体中含有单纯疱疹
病毒来源的 VSV-G 基因，提供病毒包装所需要的包膜蛋白。
英茂盛业慢病毒载体图谱：
1) pLV 载体图谱：
以上载体为用于 RNA 干扰的 pLV穿梭载体，带有 GFP 标记。用于其他研究的 pLV
载体的框架与此基本相同。[具体结构请参考克隆构建部分]
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2) pHelper 1.0 载体图谱：
3) pHelper 2.0 载体图谱：
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