第02章-动物实验技术.pptVIP

（三）移植性肿瘤动物模型 抗肿瘤药物筛选最常用的是移植性肿瘤模型，这种模型虽有局限性，不能反应出人体肿瘤的许多特点，但操作简单，便于大量筛选抗肿瘤药物。目前，世界上现存的动物移植性肿瘤有400余种，分同系或同种移植与异种移植两大类。自体式同系动物肿瘤移植不产生排斥现象，移植瘤株的稳定性至关重要，为达到可靠的稳定性，通常需连续传代15代以上，其浸润和转移的生物学特征，以及对化疗药物的敏感程度均不确定。 1．动物的选择 根据瘤源需要，用纯系或杂种动物。实验用小鼠体重以18~24g，大鼠以50~80 g为宜。所用动物必须发育良好，身体健康。 2．接种常规 在严格消毒的接种罩或无菌室内接种瘤液。整个过程无菌操作：选择发育良好、肿瘤生长旺盛的瘤源动物，处死后取腹水型瘤源，可用注射器抽出腹水，以灭菌生理盐水（低温操作）稀释后，进行动物腹腔接种。取实体瘤时，需切开皮肤，选生长良好、无坏死或液化的瘤组织少许，加一定量的生理盐水，用组织研磨器制成细胞悬液，接种部位与实体瘤相同。 3．常用接种方法 （1）腹水瘤接种方法：抽取接种后第5~6d的小鼠腹水0.1~0.2ml，从下腹部注入接种于腹腔，注意勿损及内脏。针头穿过皮肤后，将针往前推进少许，再穿过腹壁，以免注入的瘤液外溢。一代接种使用3~5只动物。如需大量动物接种，则将腹水取出后先加入相当于腹水量1/10的1%枸橼酸钠水溶液抗凝，用白细胞计数器计数瘤细胞，按比例加入生理盐水，配制成每0.2 ml中含400万瘤细胞的腹水稀释液。接种时注意避免瘤细胞聚集于注射器的一侧。如一个瘤源不够，可使用两个同代的瘤源。 （2）实体瘤传代接种方法： 1）悬液接种法：选择瘤体外围的半透明鱼肉样瘤组织，剪成小块，用研磨器制成1:10的瘤细胞生理盐水悬液。抽取0.1~0.2ml注入实验动物腋窝中部外侧皮下。 2）小块接种法：从瘤源选出外生长良好的瘤组织，剪成0.2~0.3mm3的小块。分离皮下组织，使形成一三角形“皮袋”，将3~5块瘤组织植入腋窝或腹股沟“皮袋”底部。此处血运丰富，瘤组织易于存活； 3）瘤组织匀浆接种法：将选好的瘤组织研磨成匀浆，不加生理盐水，用粗针头吸取，皮下或肌肉注射。适用于大动物，为保证较高的成活率，可适当加大剂量。 4．常用移植性肿瘤动物模型 （1）人肺癌裸鼠常位移植：PG为肺巨细胞癌，采用RPMI 1640培养液加10%小牛血清和双抗生素体外培养，以0.25%胰蛋白酶消化收集细胞进行移植。以水合氯醛腹腔注射麻醉裸鼠，颈部正中胸骨切迹上方纵行切开皮肤，分离气管，用8号针头于气管环之间刺一小孔，插入成1200角的6号针头，向右主支气管注入4×105个PG细胞（总液体量0.03ml），然后立即将动物置右侧卧位，缝合切口，在白炽灯下恢复10min，放回饲养室观察。动物于接种后12~14d开始出现消瘦，第4~5周即有动物恶病质死亡，肺内肿瘤呈灰白色结节，数目不等，肿瘤较广泛地浸润胸部器官，部分伴纵隔淋巴结转移。 （2）人肝癌和胰腺癌原位移植：取患者手术新鲜标本置于RPMI 1640培养液中，将新鲜无坏死的癌组织剪切成2~3mm3小块。选择3~5周龄、18~20g体重的裸鼠，性别不限，用硫喷妥钠按30mg/kg体重（0.3~0.4ml）腹腔注射麻醉。取左侧卧位，无菌操作，右肋缘下斜切口，打开腹腔，暴露肝脏或胰腺，将准备好的人癌组织块植入肝脏或胰腺，缝合止血，消毒。当原位移植瘤长到直径1~2cm时（3~5周），无菌操作取出肿瘤，以上述方法在裸鼠体内传代移植。原位移植瘤保留了人原发瘤的形态和功能特点。 （3）人胃癌裸鼠原位接种模型：选择3~5周龄、18~20g体重的裸鼠，性别不限，用硫喷妥钠按30mg/kg体重（0.3~0.4ml）腹腔注射麻醉。无菌操作，打开腹腔，在近前胃处的胃黏膜下接种人胃癌细胞SGC-7901悬液0.02ml（约含106癌细胞），接种后3d，可见接种部位苍白、僵硬；接种后1周除黏膜接种部位隆起外，结节向周围浸润；接种后2周胃部隆起肿块明显，胃黏膜皱襞消失，局部淋巴结肿大，腹腔内可见少量腹水；接种后3周，胃部肿块增大质硬，与周围结肠、脾等粘连，证明癌细胞在黏膜和肌层浸润生长累及浆膜。 （四）肿瘤转移模型 肿瘤转移模型的分类尚不统一，通常分为两大类，即自发性转移和实验性转移模型。自发性转移模型又分为血行转移、淋巴转移和特异性器官转移模型。自发性转移模型，根据裸鼠体内血流特点，形成血运性转移模型，常用脾-肝循环和尾静脉注射，前者是将肿瘤细胞悬液在动物脾内注射，在肝