水产微生物—微生物的生长和生理.docVIP

第六章 微生物的生长和生理 细菌的生长繁殖表现为细菌的组分和数量的增加。 细菌个体的生长繁殖 细菌一般以简单的二分裂方式进行无性繁殖。在适宜条件下，多数细菌繁殖速度很快。细菌分裂数量倍增所需要的时间称为代时，多数细菌为20-30min。个别细菌繁殖速度较慢。 细菌群体的生长繁殖 随着群体中各个个体的进一步生长、繁殖，就引起了这一群体的生长。群体的生长可用其重量、体积、个体浓度或密度等作指标来测定。在微生物的研究和应用中，由于微生物的个体极小，只要群体的生长才有意义，因此，凡提到的“生长”时，一般均指群体生长。 第一节 微生物生长的测定 描述不同种类、不同生长状态的微生物生长情况，需选用不同的测定指标。 一、微生物生长量和生理指标测定法 （一）直接法 有粗放的测体积法（在刻度离心管中测沉降量）和精确的称干重法。称干重法是将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来，然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的10%～20%，而一个细菌细胞一般重约10-12～10-13g。该法适合菌浓较高的样品。 （二）间接法 １、比浊法： 原理是在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌数越多，光密度越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。特点：快速、简便；但易受干扰。 ２、生理指标法： 与微生物生长量相平行的生理指标很多，可以根据实验目的和条件适当选用。最重要的是测含氮量。蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分，通过测含氮量就可推知微生物的浓度。一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%，根据一定体积培养液中的含氮量再乘以6.25，就可测得粗蛋白的含量。其他方法还包括测含碳、磷、DNA、RNA、耗氧量、消耗底物量、产二氧化碳、产酸、产热、粘度等，都可用于生长量的测定。 二、微生物细胞数目的检测法 此法适宜于测定处于单细胞状态的细菌和酵母菌，而对放线菌和霉菌等丝状生长的微生物而言，则只能计算其孢子数。 直接法 适用范围：个体较大细胞，如酵母菌等。不适用于细菌等个体较小的细胞，因为（1）细菌细胞太小，不易沉降；（2）在油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。 间接法 平板菌落计数法：可用浇注平板或涂布平板等方法进行。 稀释倒平板法： 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1，000、......）， 然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现分散的菌落，即菌落形成单位（cfu），根据每皿上形成的cfu数乘上相应的稀释度就可推算出菌样的含菌数。 涂布平板法： 由于将含菌材料先加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后即出现cfu，用上述方法就可以推算出菌样的含菌数。 第二节　微生物的生长规律 一、单细胞微生物的生长曲线 定量描述液体培养基中单细胞微生物群体生长规律的实验曲线，称为典型生长曲线。当把少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中后，在适宜的温度、通气等条件下，该群体就会由小到大，发生有规律的增长。通常以细胞数目的对数值为纵坐标，以培养时间为横坐标，就可以绘出微生物的典型生长曲线，以反映微生物群体生长规律。根据微生物的生长速率常数，即每小时的分裂次数的不同，典型生长曲线可分四期： 1、迟缓期 细菌进入新环境后的短暂适应阶段。该期菌体增大，代谢活跃，为细菌的分裂繁殖合成并积累充足的酶、辅酶和中间代谢产物；但分裂迟缓，繁殖极少。迟缓期长短不一，按菌种、接种菌的菌龄和菌量，以及营养物等不同而异，一般为1～4h。 2、对数期 又称指数期。细菌在该期生长迅速，活菌数以恒定的几何级数增长，生长曲线图上细菌数的对数呈直线上升，达到顶峰状态。此期细菌的形态、染色性、生理活性等都较典型，对外界环境因素的作用敏感。因此，研究细菌的生物学性状（形态染色、生化反应、药物敏感试验等）应选用该期的细菌。一般细菌对数期在培养后的8～18h。 3、稳定期 由于培养基中营养物质消耗，有害代谢产物的积聚，该期细菌繁殖速度渐减，死亡数逐渐增加，细菌形态、染色性和生理性状常有