浅谈《微生物学基础》.docVIP

《微生物学基础》 教 案 所属系别： 护理系?医化教研组 授课班级： 2014级 19、20、21 班 主讲教师： 丁英丽 起止时间：2015年9月至2015年12月 《 微生物学基础 》教案首页 授课教师 丁英丽 课时序号 35-36 授课周次 第 11 周 授课时间 2015.11.18 授课对象 2014级药剂专业 授课班级 2014级19、20、21班 授课题目 第五单元 微生物分离纯化技术 教学目标 掌握：培养物及纯培养的概念。 熟悉：划线分离纯化及稀释平板法分离纯化的原理。 了解：涂布分离纯化的原理。 教学重点 与 教学难点 重点：划线分离纯化及稀释平板法分离纯化的原理。 难点：划线分离纯化及稀释平板法分离纯化的原理。 教学方法 讲授、合作探究 教 具 多媒体、板书 教学内容 知识回顾 新课导入 学习目标阅读 授课内容：微生物细胞数测定技术 本节小结 知识延伸 作业布置、课后预习 布置作业 P160,1、2题。 参考资料 微生物学基础/赵金海主编.中国轻工业出版社出版，2015.4 教学反思 教 学 主 要 内 容 教 学 过 程 【知识回顾】 微生物生长测定常用的方法有哪些？其中直接计数法有哪些，间接计数法有哪些？ 【新课导入】 提问导入新课。 【授课内容】 一、概述 微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物，而只有一种微生物的培养物称为纯培养物。 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养物。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。 二、方法 1、划线法 用接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。 【看图讲解】 二、稀释平板法 先将待分离的材料用无菌水做一系列的稀释，然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50摄氏度左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落或重复以上操作数次，便可得到纯培养物。 三、涂布平板法 由于将含菌材料先加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此，在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌培养皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。 四、稀释摇管法 先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50摄氏度左右，将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇匀，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。培养后，菌落形成在琼脂柱中间。进行单菌落的挑取和移植，需先用一支灭菌针将液体石蜡-石蜡盖取出，再用一支毛细管插入琼脂和管壁之间，吹入无菌无氧气体，将琼脂柱吸出，置于培养皿中，用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察和菌落的移植。 五、单细胞挑取法 特点：营养琼脂平板上不能形成菌落 分离难度与细胞或个体的大小成反比 个体较小的微生物需采用显微操作仪 较大的微生物可使用毛细管提取 六、选择培养基分离法 原理：创造适于目的微生物生长条件 促使目的微生物快速生长呈优势菌 抑制非目的微生物生长 从混杂微生物中分离目的微生物 1、利用选择培养基进行直接分离 举例：（1）分离筛选蛋白酶产生细菌 （2）分离筛选产高温淀粉酶（65℃）细菌 2、富集培养 人为创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。 举例：从土壤中分离能产生?－半乳糖苷酶的微生物 七、小滴分离法（略） 【课堂总结】 1、什么是培养物？什么是纯培养物？