白刺原生质体制备及培养.doc

白刺原生质体制备及培养摘 要：以西伯利亚白刺幼苗子叶为材料，采用L9（34）正交试验，比较酶组合、渗稳剂甘露醇浓度、酶解温度和酶解时间对其原生质体制备的影响。试验结果表明，适宜酶解条件为1% 纤维素酶Onozuka R-10+0.2% 果胶酶 Y-23+0.8 molL-1甘露醇，28 ℃下酶解3.5 h。而且，经过预处理的子叶，其原生质体得率优于未处理的。在MS+2,4-D 1 mgL-1+6-BA 0.5 mg?L-1+0.7 mol?L-1甘露醇的固液双层培养基中，原生质体能形成细胞团 关键词： 白刺；预处理；原生质体制备；原生质体培养；细胞团 中图分类号：R285.1 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006－6500.2011.06.006 Protoplast Preparation and Culture of Nitraria sibirica Pall. HU Yan, GUO Cheng-jin （College of Life Science, Tianjin Normal University, Tianjin 300387，China） Ａｂｓｔｒａｃｔ: The cotyledons of Nitraria sibirica Pall. were used as materials in this work.The effects of combinations of enzyme mixture，the concentration of mannitol，the temperature and the time of enzymolysis on the protoplast preparation were studied by orthogonal design with L9（34）. The results showed that the optimal preparing condition was by 1% cellulase(Onozuka R-10)+0.2% Pectolyase Y-23+0.8 molL-1 mannitol for 3.5 h,under 28 ℃. However, under the same conditions, more protoplast would be get from the cotyledons which had been treated by tissue culture. Besides, protoplast were cultured in solid-liquid double MS medium containing 2,4-D 1 mg?L-1+6-BA 0.5 mg?L-1+0.7 mol?L-1 mannitol, and then developed into cell cluster. Key words: Nitraria sibirica Pall.；pretreatment；protoplast preparation； protoplast culture；cell cluster 西伯利亚白刺(Nitraria sibirica Pall.)隶属于蒺藜科，白刺属。其浆果状核果又称卡密、沙樱桃、酸胖，熟时暗红色，含有大量红色色素，富含氨基酸、微量元素、黄酮、VC等各类生理活性物质。白刺果可药食两用，具有健脾胃、调经活血、降压等功效，可用于治疗消化不良、月经不调和高血压、头晕等症[1]。近年来，还发现白刺果油含有丰富的维生素E成分，具有较强抗氧化性作用[2] 西伯利亚白刺是丛状小灌木，匍匐地面生长[3]。它能生长在土壤含盐量2.5%～3.15%、pH值＞8的重盐碱土中，是重盐碱土指示植物。可固沙护坡、改良盐碱地、绿化、观赏[4]。该植物的组织培养和快速繁殖已有报道[5-7]，而原生质体制备尚未见报道。白刺原生质体的高效制备对其诱变和细胞杂交育种及丰富原生质体技术等具较高的理论和实践意义 1 材料和方法 1.1 试验材料 西伯利亚白刺果实采自天津滨海新区大港马圈村盐碱地 1.2 试验试剂 MS培养基，6-BA，IBA，琼脂（天津市珠江卫生材料厂），甘露醇，果胶酶Y-23（北京鼎国生物技术有限责任公司），纤维素酶R-10、离析酶R-10(北京普博欣生物技术有限公司) CPW溶液：KH2PO4 27 . 2 mgL-1、KNO3 101 mgL-1、 MgSO47H2O 246 mg?L-1 、KI 0.16 mgL-1、CuSO4 0.025 mgL-1 、CaCl22H2O 1 480 mg?L-1