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第十一章 甾体激素类药物的分析 一、定义和分类 定义：甾体激素类药物是指具有甾体结构的激素类药物，主要包括肾上腺皮质激素和性激素。 分类： 二、结构特征 甾体激素类药物的母体结构为环戊烷多氢菲，共有A、B、C、D四个环。 10、13位有甲基，为雄甾烷，雄激素母体 13位有甲基，为同化激素母体 10、13位有甲基，17位有乙基（二个碳原子），为孕甾烷，孕激素母体 A环位苯环，13位有甲基，为雌甾烷，雌激素母体 1、糖皮质激素结构特征 1、2位引入双键，如泼尼松，氢化泼尼松，氟轻松，地塞米松等； 9位引入氟：如氟轻松，地塞米松，倍他米松等； 11位引入羟基或羰基：如泼尼松→氢化泼尼松，可的松→氢化可的松； 16位引入甲基或羟基：如引入甲基,地塞米松，倍他米松；引入羟基，曲安萘德； 这些结构改变，引出一大类糖皮质激素类药物。 结构特征： A环3位羰基，4，5位双键，形成共轭体系，Δ4－3－酮； C环11位上有扬原子，羰基或羟基（β－用实线表示）； D环17位上有α－羟基（用虚线表示）； D环17位上有α－醇酮基（O=C-CH2OH）6，9位可以有氟原子。 总之，可供分析用的主要基团有：Δ4－3－酮，17－α－醇酮基，有机氟，酯类结构。 2、雄激素和蛋白同化激素 结构特征： A环，Δ4－3－酮 17位β-OH 雄激素：10，13位有甲基，同化激素：10位无甲基 3、雌激素和孕激素 雌激素结构特征： A环为苯环 3位为酚羟基 17位β－OH或有乙炔基 10无甲基 孕激素结构特征： A环，Δ4－3－酮 17位有羟基（黄体酮除外） 17位甲基酮 17－CO-CH3 10位有些有甲基，有些无甲基。 综上所述，可用于分析签定用的基团： 1、Δ4－3－酮；2、C17位 α－醇酮基，羟基，乙炔基，甲基酮；3、A环酚羟基；4、酯基及有机氟 三、鉴别 1、红外光谱法 供试品红外图谱与标准图谱比较。一致 P241～257，各种甾体激素的红外图谱。 2、显色反应 与强酸的呈色反应 许多甾体激素能与硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等反应呈色。 其中以与硫酸的呈色反应应用较广，呈现一定的颜色或荧光。 如醋酸可的松 →呈现黄色 氢化可的松 →呈现绿色荧光 P263，表11－9，部分甾体激素类药物与硫酸反应的现象 此外，尚有硫酸加各种溶剂作为显色剂，如：硫酸－甲醇，硫酸－乙醇 中国药典中甲睾酮，甲羟孕酮就用此法鉴别。 某些官能团的呈色反应 A、C3－酮基，C20-酮基 能与一般羰基试剂反应，呈现各种颜色。 羰基试剂：2.4－二硝基苯肼；异烟肼，羟胺，氨基脲 如2.4－二硝基苯肼和黄体酮反应呈现黄色。 B、A环为苯酚结构 用FeCl3显色；和重氮盐反应，生成有色偶氮化合物 C、17位甲基酮 17－CO-CH3 能与亚硝基铁氰化钠反应呈现各种颜色。 如：黄体酮和亚硝基铁氰化钠反应，现蓝紫色，为黄体酮的特征反应，其他甾体激素则显橙色或无色。 D、α－醇酮 17－CO-CH2OH 具有还原性，能与许多氧化剂反应，如氨制硝酸银，斐林试剂，四氮唑盐等。 其中以四氮唑盐反应最常用。常见的有氯化三苯四氮唑和四氮唑蓝。 氯化三苯四氮唑： 四氮唑蓝 E、17－乙炔基，和硝酸银反应形成沉淀 如：炔诺酮，炔雌醇 3、薄层层析鉴别法 供试品和标准品溶液做薄层层析 如为同一物质，应在同一位置出现，如果不在同一位置出现，则可能非同一物质（Rf值不同）。 四、检查 甾体激素类药物多由其他甾体化合物或结构类似的其他甾体激素经结构改造而来的，因而可能会带来原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂等许多杂质。 1、游离磷酸盐 如:倍他米松磷酸钠中检查磷酸盐 2、甲醇和丙酮 如：地塞米松磷酸钠中检查甲醇和丙酮 采用气相色谱法：要求，丙酮含量不超过5.0％，不得含有甲醇。 3、雌酮 如：炔雌醇中检查雌酮 加间二硝基苯，能在雌酮16位上加成 4、其他甾体 薄层层析，采用自身对照法检查 将供试品配成高浓度和低浓度两种溶液，在薄层上展开 如：氢化可的松的检查 供试品配成：3.0mg/ml和60ug/ml 要求：高浓度杂质斑点数不超过规定量（如氢化可的松杂质斑点数不超过3个），高浓度杂质斑点的颜色、大小不能深于低浓度的主斑点。 举例：P267－表11－11 部分甾体激素类药物的其他甾体检查法 五、含量测定 甾体激素类药物含量测定方法很多，可用容量法（乙炔基用硝酸银滴定）、比色法（各种颜色，如和四氮唑盐反应）、紫外分光光度法（分子中有共轭体系）、荧光法（有些激素反应后有荧光产生）、气相色谱法、高效液相色谱法等。 主要讲解紫外分光光度法测定甾体激素类药物： 由于甾体激素类药物中有许多含有Δ4－3－酮、Δ4.1－3－酮、苯环等，都具有共轭体系，在紫外区有